實验十七、实时荧光PCR检测沙门氏菌（salmonella .spp）.pptVIP

实验十七、实时荧光PCR检测沙门氏菌(salmonella .spp) 一、实验目的： 学习采用实时荧光PCR仪检测食品、化妆品等中的沙门氏菌(salmonella .spp)的特异检测。 二、实验原理： 试剂盒采用PCR 方法结合荧光探针的体外扩增和检测技术，适用于食品、卫生防疫、化妆品等沙门氏菌(salmonella .spp)的特异检测。 三、仪器与试剂 1、试剂盒组成 DNA提取液 PCR反应液 Taq 酶 UNG酶阳性对照阴性对照 2、仪器 Roche lightcycler, ABI系列/MJ opticon2，Bio-Rad/博日line-gene荧光PCR检测仪 四、实验步骤 样品的收集及处理以及增菌培养 严格按照无菌操作规程称取25g样品按国标法进行增菌培养。增菌样品可暂存4℃冰箱，24小时内检验。 使用方法（使用前请仔细阅读本操作流程） 1、增菌液处理（样本处理区） 增菌液的处理可以采取以下方法： 　　取待测样本增菌液1ml加到1.5ml无菌离心管中，8,000rpm离心5min，尽量吸弃上清；加入50ul DNA提取液（使用前室温解冻并充分混匀，快速吸取），混匀后沸水浴5min，13,000rpm离心5min，取上清保存于-20℃备用以待检测。 2、扩增试剂准备（PCR 前准备区） 从试剂盒中取出PCR 反应液，室温融化并振荡混匀，取出Taq酶及UN