第10章常用分子生物学技术的原理及应用幻灯片.pptVIP

第十章;第 一 节分子杂交与印迹技术Molecular Hybridization Blotting Technology;核酸分子杂交 (nucleic acid hybridization ) 在DNA复性过程中，如果把不同DNA单链分子放在同一溶液中，或把DNA与RNA放在一起，只要在DNA或RNA的单链分子之间有一定的碱基配对关系，就可以在不同的分子之间形成杂化双链(heteroduplex) 。;复性;（一）印迹技术 （二）探针技术;二、印迹技术的类别及应用; 其他 斑点印迹 (dot blotting) 原位杂交 (in situ hybridization) DNA点阵 (DNA array) DNA芯片技术 (DNA chip);三种印迹技术的比较;分子杂交实验;放射自显影照片;DNA点阵;第 二 节 聚 合 酶 链 反 应Polymerase Chain Reaction;PCR的基本工作原理;5?;Cycle 3;模板DNA 特异性引物 耐热DNA聚合酶 dNTPs Mg2+ ;三、PCR的基本反应步骤;（一）目的基因的克隆 （二）基因的体外突变 （三）DNA和RNA的微量分析 （四）DNA序列测定 （五）基因突变分析;三、几种重要的PCR衍生技术;实时PCR技术原理;第 三 节 核 酸 序 列 分 析Nucleic Acid Sequence Analysis;核酸序列分析的基本原理;一、化学裂解法(Maxam-Gillbert法);二、DNA链末端合成终止法;;三、DNA自动测序 ;DNA自动测序结果举例;基 因 文 库Gene Library;基因组DNA文库 (genomic DNA library) cDNA文库 (cDNA library) ;基因组DNA文库;第一轮筛选;疾病相关基因的克隆与鉴定Cloning and Identification of Disease Relative Genes;克隆疾病相关基因的策略;定义 从对一种致病基因的功能的了解出发，克隆该致病基因。;克隆方式 ① 利用特异性抗体筛选表达型cDNA文库； ② 根据已知的部分氨基酸序列合成寡核苷酸作探针，筛选cDNA文库。;（二）定位克隆;（三）非定位候选基因克隆策略;（四）定位候选基因克隆策略;第 六 节遗传修饰动物模型的建立及应用;转基因技术 采用基因转移技术使目的基因整合入受精卵细胞或胚胎干细胞，然后将细胞导入动物子宫，使之发育成个体。 ;;核转移技术 即动物整体克隆技术，将动物体细胞核全部导入另一个体的去胞核的受精卵内，使之发育成个体，即克隆(clone)。;基因剔除技术 也称基因靶向(gene targeting)灭活，有目的去除动物体内某种基因的技术。;四、基因转移和基因剔除技术在医学中的应用;第 七 节??? ????? 生 物 芯 片 技 术;DNA芯片(DNA chip) cDNA芯片(cDNA chip) 是指将许多特定的DNA片段或cDNA片段作为探针，有规律地紧密排列固定于单位面积的支持物上 。;;是将高度密集排列的蛋白分子作为探针点阵固定在固相支持物上，当与待测蛋白样品反应时，可捕获样品中的靶蛋白，再经检测系统对靶蛋白进行定性和定量分析的一种技术。;第 八 节 蛋白质相互作用研究技术 ;蛋白质之间相互作用以及通过相互作用而形成的蛋白复合物是细胞各种基本功能的主要完成者。几乎所有的重要生命活动，包括DNA的复制与转录、蛋白质的合成与分泌、信号转导和代谢等等，都离不开蛋白质之间的相互作用。 ;酵母双杂交 各种亲和分析（亲和色谱、免疫共沉淀等） 荧光共振能量转换效应分析 噬菌体显示系统筛选等等;一、酵母双杂交技术的基本原理;?二、酵母双杂交系统的应用