酶工程-张一哲 第4章+酶的提取与分离纯化.pptVIP

第四章 酶的提取与分离纯化;一、生物下游加工技术;二、分离纯化的一般流程;首先，应对被纯化的酶的理化性质有一个比较全面的了解; 其次，判断采用的方法和条件是否得当，始终以活力回收率 和纯化倍数为指标； 再者，在纯化工作中，往往不宜重复采用相同的步骤和条件； 最后，要严格控制操作条件。随着酶的逐步纯净，杂蛋白含量亦逐步降低，蛋白质之间的相互作用力随之下降，酶更不稳定，因此，更要防止酶变性。;三、酶分离纯化的基本原则 （一）酶分离纯化包括三个基本环节; 许多酶存在于细胞内。为了提取这些 胞内酶，首先需要对细胞进行破碎处理。 ;细胞壁的主要成分： 细菌：肽聚糖：N-乙酰萄糖胺，N-乙酰 胞壁酸 真菌和酵母：萄聚糖，甘露聚糖 藻类：纤丝状多糖类 细胞破碎的方法： 1）机械破碎法 2）物理破碎法 3）化学破碎法 4）生物法（酶解）;利用机械力的搅拌，剪切或研碎细胞。 组织捣碎机，细胞研磨器，匀浆器等。;通过温度，压力，声波等各种物理因素的作 用，将组织细胞破碎的方法， 冻融法、压差法、超声波法;;通过各种化学试剂对细胞膜的作用，而使细胞破碎的方法。 有机溶剂处理：破坏膜磷脂结构，常用丙酮、丁醇、氯仿等。 非离子型表面活性剂处理：改变膜通透性，使之溶解，再提膜蛋白。常