细胞生物学第三章 细胞生物学研究方法.ppt

第三章细胞生物学研究方法;细胞生物学研究方法;一、细胞形态结构的观察方法;（一）光学显微镜技术;1、普通光学显微镜技术;分辨率：指区分开两个质点间的最小距离。 d=0.61λ/ NA （NA= ηsinθ） d：分辨率 λ：波长 NA：数值孔径 η：物镜与物体间介质折射率 θ：光束进入物镜的半角;2、相差显微镜技术;相差显微镜将光程差或相位差转换为振幅差，即明暗差别。相差显微镜的样品不需染色，可以观察活细胞。 光线通过不同密度的物质时，其滞留程度也不同，密度大则光的滞留时间长，密度小则滞留时间短。;3、微分干涉显微镜技术;4、荧光显微镜技术;5、激光扫描共焦显微镜;;（二）电子显微镜技术;主要电镜制片技术 超薄切片技术 负染色技术 冷冻蚀刻技术 电镜三维重构技术 扫描电镜（SEM，Scanning electron microscope）;显微镜;1、超薄切片技术;2、负染色技术;3、冷冻蚀刻技术;冷冻蚀刻技术主要用来观察断裂面的蛋白质颗粒和膜表面形貌特征，样品不需包埋、固定，能更好地保持样品的真实结构。 ;4、电镜三维重构技术;5、扫描电子显微镜技术;光镜、透射电镜、扫描电镜的比较;（三）扫描隧道显微镜技术;二、细胞组分的分析方法;（一）细胞组分的分离技术;1、离心分离技术;密度梯度离心;类型 速度沉降：主要用于分离密度相近而大小不一的细胞组分。