植入前遗传学诊断课件.pptVIP

胚胎植入前遗传学诊断; 种植前遗传学诊断（PGD）是指从体外受精的胚胎去除部分细胞或从卵子取出极体进行染色体和基因学检测，最终选择正常的胚胎行宫腔移植，从而防止遗传病的发生。;PGD技术是产前诊断技术的延伸，是一种更早的产前诊断，相比产前诊断，PGD具有一些无可比拟的优点。PGD在妊娠的发生前完成，避免了产前诊断带来的人工流产或中期妊娠引产给母体及家庭带来的精神和体格上的重复创伤。 ; PGD的主要应用范围 进行PGD的主要对象是那些可能有遗传异常和高危遗传因素，需要产前诊断的病例，尤其是那些具有异常妊娠结局或具有单基因疾病的不育夫妇。目前PGD主要针对有高风险生育染色体病、性连锁隐性遗传病、基因病后代的夫妇。 ; 1.常染色体隐性遗传病 常见的有地中海贫血、镰状细胞贫血、纤维囊性疾病、脊柱性肌萎缩、家族性自主神经失调症。 2.常染色体隐性遗传病 常见的有早发性原发性扭转及张力障碍和腓骨肌萎缩症。 3.X连锁疾病 包括X连锁隐性遗传病如血友病、色盲、假肥大性肌营养不良等，X连锁显性遗传病如遗传性肾炎、家族性低磷酸血症佝偻病。; PGD中遗传分析材料的获取 （一）活检材料 1.极体活检 极体活检是卵子减数分裂过程中的产物，根据其检测结果可以推测出卵子的遗传信息，从而选择正常卵子发育而来的胚胎进行移植。由于存在染色体互换，需要分别对第一极体和第二极体进行活检，以免误诊。但部分学者认为第一极体活检在HCG注射后36-42h,第二极体活检在受精后18-22h。极体活检的优势在于对操作后胚胎发育没有明显影响，但极体活检不能检测父源性遗传异常。 ; 2.卵裂球活检 在取卵后第三天胚胎发育到6-10细胞期进行活检是目前PGD的主要方式。因为此时卵裂球仍是全能性的，故取出1-2个细胞不会明显影响胚胎的进一步发育。一般8细胞期以前的胚胎吸取一个卵裂球，8细胞期以后的胚胎可吸出1-2个卵裂球。卵裂球活检的优势在于可以同时诊断父方和母方染色体异常或单基因疾病。 ; 3.囊胚活检 在人类，囊胚大多在受精后第5天形成，可从囊胚的滋养层外胚层取出10个以上的细胞进行检测，为诊断分析提供了更多的细胞。囊胚活检不涉及将来发育成胎儿的内细胞团部分，避免了活检过程对胎儿发育的任何不良影响。 ; （二）活检方法 主要的胚胎活检方法包括机械法、化学法和激光法。 ; （三） 植入前遗传学诊断方法 目前，PGD常用的诊断方法有单细胞聚合酶连锁反应（PCR）技术，荧光原位杂交（FISH)技术等。 ; 1.巢式PCR PCR通过内、外两对引物，首次用外引物进行大片段产物的扩增，二次扩增则以大片段产物为模板，对于其内侧序列互补的内引物进行小片段产物的特异性扩增的方法。对特定的基因片段连续两次放大后，其诊断的敏感性、特异性大大提高。; 2.荧光PCR 采用荧光标记的不同引物或dNTP针对特异性基因片段或基因组内的短串联重复序列进行扩增，PCR产物经自动DNA测序仪或扫描仪分析。; 3.多重PCR 在一次PCR反应中对基因组中多个位点采用不相关的多对引物同时进行扩增，再结合巢式PCR技术针对目的的基因分别进行内扩增或结合荧光PCR自动测序技术得到诊断结果。; 4.全基因组扩增（WGA） 在PGD中最常用的WGA是引物延伸预扩增（PEP）。PEP采用15个碱基的随机引物序列对单个细胞的整个基因组进行扩增，可以在不知道特异性DNA序列的情况下检测DNA的多态性。在扩增时，能与基因组DNA相应位点随机退火结合，把目的基因拷贝为多个，针对该目的的基因进行二次扩增。; 5.荧光原位杂交（FISH）技术 染色体荧光原位杂交是用荧光染料对DNA探针进行标记。着色探针适用于对中期染色体进行结构分析。多条染色体FISH检测时每个DNA探针都要用不同的荧光染料进行标记。 ; 运用FISH进行PGD的适用范围： （1）染色体数目异常； （2）染色体结构异常； （3）X连锁隐性遗传病进行PGD。; END