粪肠球菌裂解性噬菌体φEn-ZZ8生物学特性的初步分析.pdfVIP

微生物与感染 　 Journal of Microbes and Infections ，August 25 ，2015 ，10（4） ：241‐246 　 http ：∥ jmi ．fudan ．edu ．cn · 142 · · 论著 · 粪肠 球 菌 裂 解 性 噬 菌 体 φ En‐ZZ8 生 物 学 特 性 的 初 步 分析 张哲 ，李菁华 ，逯茵茵 ，韩放 ，李诗恒 ，孙延波 吉林大学白求恩医学部基础医学院病原生物学系 ，长春 130021 摘 　 要 ：本研究旨在通过分离粪肠球菌裂解性噬菌体并分析其生物学特性 ，为噬菌体疗法应用于肠球菌感染 提供依据 。 以粪肠球菌为宿主菌 ，用双层琼脂法从环境污水中分离出 1 株裂解性噬菌体（命名为 φEn‐ZZ8） ， 对其生物学特性进行初步分析 。 透射电镜观察发现 ，φEn‐ZZ8 头部呈二十面体立体对称 ，直径约 40 nm ；尾 部呈丝状 ，长约 200 nm 。 吸附实验表明 ，在 10 min 内超过 90％ 的噬菌体可吸附至宿主菌细胞 。 一步生长曲 线显示 ，φEn‐ZZ8 的潜伏期为 15 min ，爆发期为 40 min ，爆发量为 150 pfu／cell 。 φEn‐ZZ8 基因组对内切酶 Hind Ⅲ 、EcoR Ⅴ 、Nde Ⅰ 、Pst Ⅰ 、Xba Ⅰ 和 Sac Ⅱ 敏感 ；基因组大小约为 42 kb 。 十二烷基硫酸钠‐聚丙烯酰胺 凝胶电泳至少可见 14 条蛋白带 ，相对分子质量为10 000 ～ 130 000 。 φEn‐ZZ8 对 26 株粪肠球菌的裂解率达 30 ．8％ ，其裂解活性在 pH 5 ～ 8 和 50 ～ 70 ℃ 条件下仍稳定 。 结果提示 ，φEn‐ZZ8 是一种裂解性强 、裂解谱较 宽 、对温度具有耐受性的裂解性噬菌体 ，有望成为抗耐药性肠球菌感染的噬菌体生物制剂 。 关键词 ：粪肠球菌 ；耐万古霉素肠球菌 ；噬菌体 ；噬菌体疗法 Biological characteristics of a virulent bacteriophage φEn‐ZZ8 isolated from Enterococcus f aecalis ZHANG Zhe ，LI Jing‐Hua ，LU Yin‐Yin ，HAN Fang ，LI Shi‐Heng ，SUN Yan‐Bo Department of Pathogen Biology ， College of Basic Medical Sciences ， Jilin University ， Changchun 130021 ， China Abstract ：This study aims to isolate lytic bacteriophages from Enterococcus faecalis （E ． faecalis） ，analyze its biological characteristics and to establish the research basis for a phage‐based therapy against Enterococcus infections ．A lytic bacteriophage （named φEn‐ZZ8） was isolated from the sewage using double‐ag