结核分枝杆菌毒素-抗毒素系统 maz EF6缺失突变株的构建及其表型的初步探讨.pdfVIP

· 180 · 微生物与感染 　 Journal of Microbes and Infections ，June 25 ，2015 ，10（3） ：180‐185 　 http ：∥ jmi ．fudan ．edu ．cn · 论著 · 结核分 枝 杆 菌 毒 素‐抗 毒 素 系 统 maz E F6 缺 失 突 变 株 的构建及其表型的初步探讨 申爱平 ，曹帅丽 ，邢建新 ，袁俐 石河子大学医学院病原生物学与免疫学教研室 ，石河子 832002 摘 　 要 ：为构建结核分枝杆菌毒素‐抗毒素系统 mazEF6 缺失突变株 ，并对其表型进行初步探讨 ，首先用聚合 酶链反应（PCR）分别从 H37Rv 标准株和 PUC‐19K 质粒扩增出 mazEF6 基因的同源臂及卡那霉素抗性基因 kan ；然后应用融合 PCR 技术将 mazEF6 基因的??源臂与 kan 基因进行杂交拼接 ，获得目的融合片段 ，将该 融合片段克隆于 pMD‐19T（simple）载体形成自杀质粒 pMD‐19T‐ mazEF6‐ kan ，并将自杀质粒转Δ化至大肠埃 希菌 DH5α 中 ；最后利用电穿孔技术将自杀质粒电转至 H37Rv 标准株中 ，在卡那霉素抗性改良罗氏培养基上 筛选 H37Rv mazEF6 缺失突变株单个菌落 ，提Δ取阳性菌株全基因组 DNA 为模板 ，PCR 扩增克隆片段并测 序 。 将所获得的 H37Rv mazEF6 缺失突变株进行遗传稳定Δ性检测后 ，对其表型进行初步研究 。 结果显示 ， 该缺失株在 15 代内未发生回复性突变 ；与野生株相比 ，缺失株生长速度缓慢且细菌形态短小 。 本研究证实 ， 融合 PCR 技术便于快速获得结核分枝杆菌缺失突变株 ；结核分枝杆菌在缺失毒素‐抗毒素系统 mazEF6 基因 后生存能力下降 ，这为进一步研究毒素‐抗毒素系统的作用奠定了基础 。 关键词 ：结核分枝杆菌 ；毒素‐抗毒素系统 ；缺失突变株 Construction and characterization of toxin‐antitoxin system mazEF6 deletion in Mycobacterium tuberculosis SHEN Ai‐Ping ，CAO Shuai‐Li ，XING Jian‐Xin ，YUAN Li Department of Pathogenic Biology and Immunology ，School of Medicine ，Shihezi University ，Shihezi 832002 ， China 　 Abstract ：To study the toxin‐antitoxin system mazEF6 of Mycobacterium tuberculosis （ M ． tuberculosis） ， deletion mutants were constructed and subjected to phenotype analysis ．First ，the flanking （homology arms） of mazEF6 gene