重组人Ⅱ型胰蛋白酶的性质及初步应用研究.pdfVIP

384 食品与药品 Food and Drug 2010年第12卷第11期 ·论 著· 重组人Ⅱ型胰蛋白酶的性质及初步应用研究 纪德凯，吴 倩，李素霞* （华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，上海 200237） 摘 要：目的 研究重组人Ⅱ型胰蛋白酶的性质及初步应用。 方法 用米氏方程和双倒数作图法确定米氏常数Km，Vmax值， BAEE法测定胰蛋白酶活性，将胰蛋白酶用于激活羧肽酶原B及细胞消化。 结果 重组人Ⅱ型胰蛋白酶最适反应温度 30 ℃，最适pH 7.6，以BAEE为底物，Km和Vmax分别为 12.7 μmol/L和212.76 μmol/min。EDTA与PMSF抑制酶活性，高于 50 ℃条件下易失活。与牛胰蛋白酶相比，重组人胰蛋白酶对羧肽酶原B有更高的激活效率，细胞消化方面二者效果基本相 同。 结论 温度及pH是影响酶稳定性的较大因素，重组人胰蛋白酶可替代牛胰蛋白酶用于激活羧肽酶原B和细胞消化。 关键词：重组人Ⅱ型胰蛋白酶；牛胰蛋白酶；性质；应用 中图分类号：Q556+.9 文献标识码：A 文章编号：1672-979X(2010)11-0384-05 Research on Characteristic and Preliminary Application of Recombinant Human Trypsin II JI De-kai, WU Qian, LI Su-xia (State Key Laboratory of Bioreactor Engineering, East China University of Science and Technology, Shanghai 200237, China) 收稿日期：2010-05-25 作者简介：纪德凯（1984-），男，辽宁人，硕士研究生，研究方向为重组蛋白克隆与表达 E-mail：jidekai888@163.com *通讯作者：李素霞，女，副教授 E-mail：lisuxia@ Tel：021 途、生产用原料的来源和质量、生产规模等灵活掌 chondroitin sulfate from sturgeon(Acipenser sinensis) and their 握。例如，原料中如含较大量胶原蛋白，是去除还是 effects on growth of ?broblasts[J]. Biol Pharm Bull, 2010, 33(8): 1268-1273. 回收联产，则方法不同。 [6] 凌沛学. 透明质酸[M]. 北京：中国轻工业出版社，2000：30-40. 2.5 超滤过程的运用，宜根据上述不同情况，严格设 [7] Lignot B, Lahogue V, Bourseau P. Enzymatic extraction of 计和实施才能成功。国外生物制药工业生产规模的各 chondroitin sulfate from skate cartilage and concentration- 个过程，均有严格设计，包括超滤在内[13]。无论是酶