铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)蛋白质组学研究方法的初步建立.pdfVIP

钱 方等：铜绿微囊藻（ Microcystis aeruginosa）蛋白质组学研究方法的初步建立 铜绿微囊藻（ Microcystis aeruginosa）蛋白质组学 研究方法的初步建立! 钱 方! 章 军 （厦门大学生命科学学院 厦门 361005） 摘 要 参照一些植物蛋白的提取方法，初步确定了铜绿微囊藻总蛋白的提取方法，即 TCA-丙酮法，并采用蛋白质组学技术路线，即双向凝胶电泳（2-D PAGE）及基质辅助激光 解吸离子化-飞行时间质谱（MALDI-TOF）分析，建立了铜绿微囊藻在对数生长期的蛋白质 组分子解剖图谱。将铜绿微囊藻接种于 BG-11 培养基 28C 培养至对数生长期，提取藻种 总蛋白进行双向电泳。从 2-D PAGE 图谱中随机选取 110 个蛋白质点进行肽质量指纹图 谱（PMF）鉴定，检索发现 21 个确定为数据库中收录的蓝藻的基因或蛋白，其中 10 个为数 据库中收录的聚球藻 Synechococcus sp . PCC6803 或微囊藻的基因或蛋白。 关键词 蛋白质组学，铜绿微囊藻，双向电泳，肽质量指纹图谱 理的有效途径。 0 引 言 1 材料与方法 铜绿微囊 藻（ Microcystis aeruginosa ）是 富 营 养 化 湖泊和水库中形成“赤潮”的主要蓝藻，许多学者研 1 .1 实验藻种 究了该藻种在不同温度、不同氮磷等条件下生长情 实 验 采 用 的 铜 绿 微 囊 藻 Microcystis aerugi- 况的变化。近些年，基于分子生物学技术的飞速发 nosa7820，由中科院武汉水生所提供。 展，聚 球 藻 Synechococcus sp . PCC6803、项 圈 藻 An- 1 .2 藻细胞培养 ［ ］ abaena sp . PCC7120 等 9 种蓝藻的全基因序列已经获 将铜绿 微 囊 藻 接 种 于 BG-11 6 培 养 基，28C 摇 得，并且一些学者已经运用蛋白质组学的手段绘制 床培养。测 值，至对数生长期。 OD750 了 的 图 谱（ 参 见 ［ ］ Synechococcus sp . PCC6803 2-D 1 .3 实验藻种总蛋白的提取 1-5 http：/ / www . kazusa . or . jp / cyano）以 及 在 不 同 条 件 下 取 对 数 生 长 期 的 藻 种 20mL，8000r / min 离 心