人组织因子(TF)酶联免疫分析试剂盒使用说明书.pdf

人组织因子（TF）酶联免疫分析试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用 检测范围：78 pg/ml - 5000 pg/ml 最低检测限：19.5 pg/ml 特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人TF ，且与其他相关蛋白无交叉反应。 有效期：6 个月 预期应用：ELISA 法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中TF 含量。 说明 1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。 2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。 概述 TF 是一个分子量为 47 kD，由 263 个氨基酸残基组成的单链跨膜糖蛋白，其基因定位于染色体1p21 ～ 1p22，由 6 ???外显子和 5 个内含子组成。TF 按细胞表面抗原命名为 CD142，属Ⅱ类细胞因子超家族成员， 具有信号转导功能。TF 由胞外区、跨膜区和胞浆区三个结构域构成：（1）胞外区由 219 个氨基酸残基所 组成，包括 2 个二硫键及 4 个结合 FⅦ/FⅦa 的关键氨基酸残基，后者是启动外源性凝血级联反应的关键部 位。（2）跨膜区是一个由23 个氨基酸残基组成的疏水结构，与磷脂紧密结合，功能尚未明确。（3）胞内 区由 21 个氨基酸残基组成，其中存在3 个与 TF 功能活性关系密切的丝氨酸残基，能被活化的蛋白激酶C （PKC）磷酸化而激活。TF 又称因子Ⅲ，是丝氨酸蛋白酶凝血因子F Ⅶ/FⅦa 的膜受体，与FⅦ结合促使其 转化为 FⅦa，并形成 TF/Ⅶa 复合体。TF/FⅦa 复合体进一步将无活性的F Ⅹ水解为有活性的 FⅩa，FⅩa 与 FⅤa 相结合并在活化血小板磷脂膜表面将凝血酶原酶解为凝血酶而启动外源性凝血过程。表达TF 的单 核细胞微粒通过其 P 选择素糖蛋白配体（PSGL-1）与血小板 P 选择素（P-selectin）相互作用而与活化血小 板结合，在血栓形成过程中起重要作用。 TF 广泛表达于各种组织细胞，如内皮细胞、单核细胞、巨噬细胞及肿瘤细胞等。正常生理状态下TF 在细 胞表面处于非激活状态，血液中血小板及单核细胞不表达TF ，活化 TF 的浓度可能在 20 fmol/L 以下。在炎 症、肿瘤、缺氧等病理状态下，诸多活性物质如组胺、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、C-反应蛋白（CRP）等 均可诱导血管内皮细胞表达TF 。研究表明，TF 在胰腺癌、乳腺癌、急性白血病及神经胶质瘤等肿瘤细胞 表面及血管内皮细胞表达均异常增高，参与肿瘤生物学行为发生及肿瘤微环境形成。较之非上皮来源恶性 肿瘤，上皮组织来源的癌细胞表达更高的 TF。Guan 等对 34 例神经胶质瘤研究表明，瘤组织TF 在蛋白和 基因水平表达均明显增加，并且随肿瘤分级增高而增加，但在正常脑组织中不表达。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗TF 抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化 的抗 TF 抗体、HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化 成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TF 呈正相关。用酶标仪在450nm 波 长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板（Assayplate ）：一块（96 孔）。 2. 标准品（Standard）：2 瓶（冻干品）。 3. 样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。 4. 生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibodyDiluent）：1×10ml/瓶。 5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidinDiluent）：1×10ml/瓶。 6. 生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100） 7. 辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100） 8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 9. 浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25 倍。 10. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 需要而未提供的试剂