重组人胰岛素原基因高效表达和纯化的研究.pdfVIP

江西农业大学学报 2014，36(2)：418—421 Acta Agricuhurae Universitatis Jiangxiensis htp：／／xuebao．jxau．edu．cn DOI：10．1 3836／j．jau．2014068 黄秀梅，叶子坚，李鹤宾．重组人胰岛素原基因高效表达和纯化的研究[J]．江西农业大学学报，2014，36(2)：418—421 重组人胰岛素原基因高效表达 和纯化的研究 黄秀梅，叶子坚 ，李鹤宾 (厦门医学高等专科学校 药学系，福建 厦门 361008) 摘要：克隆人胰岛素原基因，通过密码子优化和融合蛋白化学水解位点和纯化标签优化，构建人胰岛素原高效 原核表达系统，为重组人胰岛素原的高效表达纯化制备奠定基础。根据大肠杆菌密码子偏好性优化设计人胰 岛素原基因，通过 PCR技术获得重组基因，构建原核表达载体 pET-32a—proinsulin，转化大肠杆菌表达株 E．coli BL21，筛选人胰岛素原高效表达菌株，建立诱导表达和纯化融合蛋白技术方法。克隆获得优化的人胰岛素原 重组基因，构建原核高效表达载体，获得优化的诱导表达方法和纯化的人胰岛素原。该研究为建立胰岛素高效 制备的优化条件奠定基础。 关键词：人胰岛素原；蛋白表达；基因重组 ；pET一32a 中图分类号：Q578 文献标志码 ：A 文章编号：1000—2286(2014)02—0418—04 A Study on Efi cient Expression and Purifcation for Recombinant Human Proinsulin Gene HUANG Xiu—mei，YE Zi-jian ，LI He．bin (Department of Pharmacy，Xiamen Medical Colege，Xiamen 361008，China) Abstract：To optimize human proinsulin codon，fusion protein chemical hydrolysis sites and Duriftcati0n tags and construct human proinsulin prokaryotic expression system for high eficient expression and purifica— tion．Methods：Designing proinsulin gene according to the Escherichia coli passw0rd preference ．Geting the pm— insulin gene by PCR technology and construct the cloning prokaryotic expression vector pET一32a-proinsulin ． The pET一32a—proinsulin vector was imported into E． coli BL21．Screening human proinsulin high expIlession strain，establishing the method for proinsulin induced expression and fusion protein purification ．The oDtimiza． tion proinsulin gene was obtained，a high effective prokaryotic expression vector was constructed ． the berter method for proinsulin expression and purified human proinsulin were obtained ．The study provides the founda tion for increasing insulin output． Key words：proinsulin；protein expression；gene recombinant：pET一32a 胰岛素具有降低血糖，促进糖原、脂肪、蛋白质合成的作用，是治疗糖尿病最重要的药品之一⋯ ，具 有广泛应用前景和经济价值。人胰岛素体内合成过程并非胰岛素基因的直接产物 ，是由胰岛素基因控 制先合成前胰岛素原，即由N端至C端的连接顺序为S-B—C—A，其中S为信号肽 ，C代表 C肽(35个 Aa)，A和B分别为胰岛素的A肽(21个Aa)和B肽(30个Aa)，前胰岛素原经过信号肽酶，胰蛋白酶和 收稿日期：2013—12-16 修回日期 ：2014—03—04