柱前衍生化高效液相色谱荧光检测法测定桑叶中的1-脱氧野尻霉素.pdfVIP

第 33 卷 分析化学（FENXI HUAXUE） 研究简报 第 6 期 2005 年 6 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 817 ~ 820 柱前衍生化高效液相色谱荧光检测法 测定桑叶中的 !-脱氧野尻霉素 欧阳臻＊ 陈 钧 李永辉 （江苏大学生物与环境工程学院制药工程系，镇江 212013） 摘 要 建立了芴甲氧酰氯（FMOC-Cl）柱前荧光衍生-高效液相色谱法测定桑叶中 1-脱氧野尻霉素（DNJ）的 方法。桑叶经 0. 05 mol / L 盐酸提取，在 pH 8. 5 的硼酸盐缓冲溶液条件下，DNJ 反应生成荧光产物，然后用高 效液相色谱-荧光检测器测定。流动相为乙腈 - 0. 1% 醋酸（55I45，V / V）。线性范围为 0. 567 ~ 34 mg / L（相关 系数 r = 0. 9999）；检出限为 0. 03 mg / L。实验测得桑叶中 DNJ 含量为 0. 24% ；平均回收率为 97. 1% ，RSD 为 1. 35%（I = 6）。 关键词 桑叶，1-脱氧野尻霉素（DNJ），高效液相色谱法，柱前衍生化 ! 引 言 桑叶为桑科植物桑（Morus alba L. ）的干燥叶，始载于《神农本草经》，味苦，甘，性寒，归肺、肝经，具 有疏风清热、平肝明目的功效；历代中医药书籍中记载桑叶能够治疗消渴症，现代药理研究表明，桑叶有 ［ ，］ 效成分之一多羟基生物碱具有显著的降血糖作用 1 2 ，而 1-脱氧野尻霉素（ DNJ）为桑叶中多羟基生物 碱的一种特征性成分（一种糖苷酶抑制剂），是降血糖的主要活性成分。因此，建立一种可靠的桑叶中 DNJ 的含量测定方法可以控制药材质量。目前，DNJ 主要是采用硅烷衍生化后用 GC-MS 法鉴定其结 ［ ］ 构 3 ~ 5 ，因其分子结构中缺少发色团，很难采用高效液相色谱法直接测定含量。实验参考了文献［6］并 加以改进，利用荧光试剂芴甲氧酰氯（FMOC-Cl）与 DNJ 柱前衍生，然后用高效液相色谱法???行分离测 定，方法简便快速，灵敏准确，并具有衍生反应可在室温下进行，反应速度快，操作步骤简单以及衍生产 物稳定等特点。本方法用于桑叶中 DNJ 的测定，取得了满意的效果。国内尚未见应用本方法分析桑叶 中 DNJ 含量的报道。 # 实验部分 #. ! 仪器和试剂 JASCO LC1500 高效液相色谱系统（日本分光公司），配有 JASCO FP-1520 智能荧光检测器、JASCO PU-1580 泵、JASCO DG-1580-54 四通道脱气器、JASCO LG-1580-04 四通道梯度器、JASCOCO-1560 柱恒 温箱；N2000 色谱处理工作站（浙江大学智能研究所）；METTLERAE240 分析天平（上海托利多-梅特勒 仪器有限公司）；TGLL-18K 台式冷冻高速离心机（ 江苏太仓华美生化仪器有限公司）；电热恒温水浴箱 （上海跃进医疗器械一厂）；1810 型双二次纯水蒸馏器（上海申立玻璃仪器有限公司）。 乙腈为色谱纯（德国默克公司）；水为二次蒸馏水（本实验室自制）；FMOC-C（l Sigma 公司）；其余试 剂均为分析纯。DNJ