高效毛细管电泳法同时分离测定苏丹红Ⅰ、Ⅱ号的论文.docVIP

　　高效毛细管电泳法同时分离测定苏丹红Ⅰ、Ⅱ号的论文 高效毛细管电泳法同时分离测定苏丹红ⅰ、ⅱ号 【摘要】 　　目的采用高效毛细管电泳法（hpce）同时分离及测定苏丹红ⅰ和苏丹红ⅱ。方法利用非涂层弹性融硅石英毛细管75 μm（i.d.）×60 cm为分离通道，优化选择检测波长、缓冲溶液种类、浓度及ph值、运行电压、进样浓度、进样时间等试验参数后进行分离测定。结果在最佳实验条件下：紫外检测波长297 nm,30 mmol/l tris(ph=9.5)缓冲溶液，分离电压15 kv,进样时间20 s，较好地实现了苏丹红ⅰ和苏丹红ⅱ的基线分离及检测。结论该法简便、快速、灵敏度高。 【关键词】 高效毛细管电泳法； 苏丹红ⅰ； 苏丹红ⅱ 　　苏丹红ⅰ～ⅳ是一种人工合成的偶氮类、脂溶性的化工染色剂，其中苏丹红ⅱ，ⅲ和ⅳ均为苏丹红i的化学衍生物。苏丹红ⅰ和苏丹红ⅱ结构式如图1所示［1］。 　　苏丹红作为一种工业染料，被广泛用作染色的原料，但因其具有一定的致癌、致敏性和遗传毒性［2～3］，被国际癌症研究机构(iarc)列为第2类(对动物怀疑有致癌性物质)或第3类致癌物质，因此严禁在食品中使用，我国也明文禁止其作为色素在食品中进行添加［4］。目前国内外食品中苏丹红染料的常用检测方法是高效液相色谱法(hplc)［5，6］，液相色谱/质谱分析法(lc/ms)［7］，薄层色谱-紫外可见分光光度法［8］等。.而国内运用高效毛细管电泳法对食品中的苏丹红进行检测未见报道，故此我们建立了毛细管电泳法同时分离测定苏丹红ⅰ和苏丹红ⅱ。 　　1 器材 　　1.1 仪器cl2001高效毛细管电泳仪紫外检测器（北京彩陆科学仪器有限公司）；石英毛细管柱75 μm（i.d.）×55 cm(河北永年光纤厂)；kq520db型超声波清洗器;1810型石英自动双重纯水蒸馏器（江苏省宜兴市石英玻璃仪器厂）。 　　1.2 试剂辣椒粉（广西南宁）；苏丹红ⅰ、苏丹红ⅱ（97%，a johson matthey pany）；三（羟甲基）氨基甲烷(tris，国药集团化学试剂有限公司，b.r.)；硼酸(gb)（a.r.中国上海试剂总厂）；其他为分析纯试剂；水为实验室自备二次蒸馏水。 　　2 方法 　　分别准确称量0.000 5 g苏丹红ⅰ和苏丹红ⅱ，甲醇溶解后再分别定容至10.00 ml，配制成50.0 mg/l的苏丹红ⅰ和苏丹红ⅱ的单标储备液；分别准确称取0.000 5 g苏丹红ⅰ和苏丹红ⅱ于同一烧杯中，甲醇溶解后定容至10.00 ml，配制成50.0 mg/l的苏丹红ⅰ和苏丹红ⅱ的混合储备液。 　　取干燥辣椒粉末，准确称量1.000 0 g加30.0 ml甲醇，超声波提取30 min,冷却后减压抽滤，取滤液用甲醇定容至50.00 ml，摇匀，作为供试液。避光保存于冰箱中待用。 　　所有溶液进样前先用0.45 μm微孔滤膜过滤。 　　3 结果与讨论 　　3.1 检测波长的选择采用紫外-可见分光光度计分别对苏丹红ⅰ、ⅱ号的甲醇溶液进行扫描，得到苏丹红ⅰ、ⅱ的最大紫外吸收波长都为228 nm。本实验探究了216，228，254，297，332，478，491 nm等7个检测波长，结果显示在297 nm的检测波长下苏丹红ⅰ、 ⅱ的分离效果较好，因此选用297 nm作为分离检测波长。 　　3.2 缓冲体系的选择实验探讨了硼砂-硼酸，tris-cit, tris-硼酸，tris- nah2po4，磷酸盐等缓冲体系对分离的影响。结果表明tris-硼酸体系能够得到较好的分离效果。 　　3.3 ph值的影响ph值是影响分离度的一个重要因素。在30.0 mmol/l tris中分别加入硼酸调节ph值为8.00，8.50，9.00，9.50，10.00的缓冲体系。结果显示采用ph值为9.50的30 mmol/l的tris-硼酸缓冲体系能获得较好的分离。 　　3.4 缓冲溶液浓度的选择增加缓冲溶液的浓度，离子浓度增大，改变缓冲容量，减少溶质和管壁之间物质的作用，从而改善分离效果。缓冲溶液的浓度过大将产生大量的焦耳热，导致基线不稳，峰形变差。试验探讨了10.0，20.0，30.0，40，50，60 mmol/l这几个浓度的缓冲溶液对分离检测的影响，结果表明30 mmol/l tris（ph=9.50）分离效果较好。 　　3.5 运行电压的选择分离电压的大小不仅影响被测化合物的迁移时间，而且对分离度也有影响。高分离电压可以改善分离度，缩短分析时间。但是电压过高，毛细管内产生的焦耳热不容易散发，将引起柱效和分离度的降低，电压过低则分离时间过长。试验探讨了12，15，18，21，24 kv 5个运行电压，结果表明15 kv分离效果最佳。 　　3.6 进样时间的选择进样时间决定了进样量的大小。进样量太小，达