生物选修一大承娄杆菌的培养和分离.pptVIP

1-1什么是生物技术;1-2 传统生物技术;1-3 现代生物技术;一、细胞工程;二、发酵工程;蛋白质工程主要包括了解合成蛋白质的DNA编码序列、蛋白质的分离纯化、蛋白质的序列分析和结构功能分析、蛋白质结晶和结构力学分析等。 ; 酶工程即利用基因工程等手段，改变酶或蛋白质的折叠方式、空间结构、催化活性和稳定性等;选修1需学习的实验;实验1 大肠杆菌的培养和分离;一、基础知识 ;微生物包括哪五类：;细菌的外形与大小;革兰氏染色;细菌的构造;*细胞壁;芽孢;菌落：;菌落;细菌的营养物质 ;大肠杆菌的培养与分离;实验目的:;A.球菌 B.杆菌 C.弧菌;;大肠杆菌基础知识：;大肠杆菌的培养和分离;;培养基种类;液体培养基：;固体培养基：菌落，菌苔;半固体培养基：; 1．液体基础培养基 牛肉膏0.3g，蛋白胨1g，氯化钠0.5g ，蒸馏水100ml，加热溶解以上成分，冷至40-50℃，调pH值至7.4~7.6，煮沸3-5分钟，补足水分，过滤、分装、高压灭菌。 2．半固体基础培养基 在液体基础培养基100ml中加琼脂0.2-0.5g，加热至100℃使琼脂熔化，分装试管，高压灭菌。取出后直立放置至琼脂凝固。 3．固体基础培养基 在液体基础培养基100ml中加琼脂2-3g，加热至100℃使琼脂化，分装于试管和三角烧瓶中，高压灭菌。取出后趁热将试管倾斜一定角度放置，琼脂凝固后即成普通琼脂斜面；将三角烧瓶中培养基倾注于灭菌平皿内，凝固后即成琼脂平板基础培养基。;选择培养基;鉴别培养基;大肠杆菌菌落; 天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。 优点：营养成分丰富，培养效果好 缺点：来源受限;成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染;; 根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。 合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。 优点：标准化生产，组分和含量相对固定;成本低 缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。 ;血清中含有： ①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等） ②多种金属离子； ③激素； ④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。 ⑤各种生长因子 ⑥转移蛋白 ⑦不明成分;不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方;LB固体培养基;大肠杆菌的扩大培养;二、无菌技术; 获得纯净培养物的关键: 消毒与灭菌 (1)消毒： 概念：使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物。包括芽孢和孢子吗？;1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min（日常生活常用） 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min （对一些不耐高温的液体，常用于鲜奶的消毒） 3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源（双手使用酒精消毒） 4、紫外线消毒;（2）灭菌;b 干热灭菌 160－170℃ ；1－2h;补充：表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯; 最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。 有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。 而培养皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。 ;培养基灭菌;细菌检验的操作需在无菌室或超净工作台内进行。 无菌室、超净工作台使用前后需进行消毒。 细菌检验使用的物品使用前后需严格灭菌 标本的采集 无菌试管、烧瓶的使用;;4.接种前准备;1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？;;倒平板;;接种、划线;接种、划线;接种、划线;1、划线分离法;;(1).为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ ;(2).在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ (3).在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？;2、涂布分离法;是指将培养的菌液稀释一定的倍数,然后取一定量稀释液加在固体培养基上,用玻璃刮刀涂布在培养基平面上.;;370C恒温培养箱;划线分离法和涂布分离法哪个更