红曲霉原生质绦洛的制备、再生及其遗传转化系统.pdfVIP

维普资讯 遗 传 ???????????????????????：???～???，????? 研 究 报 告 ? 红 曲霉原生质体 的制备、再生及其遗传转化 系统? 周 礼红 ，李 国琴 ，王正祥 ，诸 葛? 健? ?江南大学 工业微生物研究 中心 ，工业生物技术教育 部重点实验室 ，无锡 ???????? 摘 要 ：原生 质体是研 究和建立 真菌遗传转化 系统 的重要 工具 。为 了建 立原 生质 体介 导 的红 曲霉遗传 转化 系 统 ，? 考察 了各种细胞 壁裂解酶 和渗透压稳定 剂等对红 曲霉 原生 质体 形成 和再 生 的影响 。将 红 曲霉 分生孢 子 在铺 有玻? 璃 纸的平板上 ??℃培养 ??～????收获 的菌丝体最有 利于原生质 体的形成 和释放 。红 曲霉 菌丝体 形成 和释放 原生? 质体最适裂 解酶和酶 解时 间分别 为 ：?．?％ ?????????????、?．?％ ?????????和 ?％ ????????的酶 组合 ，??℃ 作 用 ?．?? ?；最适 渗透压 稳定剂是 ：????／???????。最 适合原生 质体再生 的培养基 为含 ?．?????／?蔗糖 的 ?? 培养基 。原 生? 质体??涂 布单层再生培 养基 的方 法 ，再 生率最高 ，菌株 ???和 ???分 别为 ?．?％和 ??．?％ 。在 ???和 ?????存 在? 下 ，以潮 霉素 ?为抗 生素选择 标记 ，用质粒 ?????????和 ????共转 化菌 株 ???原生质 体 ，每微 克 ???可获得 ???? 个稳定转 化子