间接化学发光剂.ppt

第九章 化学发光免疫分析技术;教学要求;教学内容; 发光免疫分析（chemiluminescence immunoassay,CLIA）: 是将发光分析和免疫反应相结合而建立起来的一种新的检测微量抗原或抗体的新型标记免疫分析技术。 ;第一节 概论;发光的分类;发光的分类;发光的分类;化学激发 发光 ;直接化学发光 间接化学发光; A十B C* C* C＋ h·γ 其中γ为光子，C*表示C处于单线激发态。;化学发光产生的条件; 化学发光反应的发光效率（φCL）又称化学发光反应量子产率，是指发光剂在反应中的发光分子数与参加反应的分子数之比，取决于生成激发态产物分子的化学激发效率（φCE）和激发态分子的发射效率（φEM）。化学发光反应的发光效率、光辐射的能量大小以及光谱范围，完全由发光物质的性质所决定，每一个发光反应都具有其特征性的化学发光光谱和不同的化学发光效率。;按标记物是否分离： 均相反应 非均相反应 按标记物能否直接发光： 直接化学发光技术 间接化学发光技术;固相分离：板式或管式的化学发光分析系统 国产品牌的化学发光系统 过滤分离：过滤膜 雅培微粒子化学发光分析系统 珠式分离：聚丙烯酰胺珠子 西门子化学发光分析系统 顺磁性颗粒分离：含三氧化二铁的聚苯乙烯小颗粒 首选分离方法;第二节 化学发光剂和标记技术;直接化学发光剂在发光免疫分析过程中不需酶的催化直接参与发光反应，它们在化学结构上有产生发光的特有基团，可直接标记抗原或抗体。;吖啶酯 在碱性条件下被H2O2氧化时,发出波长为470nm的光，具有很高的发光效率，其激发态产物　N-甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。 ;三联吡啶钌 三联吡啶钌 [RU(bpy)3]2+是电化学发光剂，它和电子供体三丙胺（TPA）在阳电极表面可同时失去一个电子而发生氧化反应。（620nm） ;酶促反应发光剂 利用标记酶的催化作用，使发光剂（底物）发光，这一类需酶催化后发光的发光剂称为酶促反应发光剂。;鲁米诺;AMPPD 〔3-(2‘-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3“-磷酰氧基)苯-1,2-二氧杂环丁烷〕〕;酞箐、二甲基噻吩衍生物及Eu螯合物 通过活性离子氧传递连接的间接化学发光剂;发光剂的标记技术;常用标记方法 碳二亚胺（EDC）缩合法 过碘酸钠氧化法 重氮盐偶联法 N-羟基琥珀酰亚胺活化法;1. 碳二亚胺（EDC）缩合法 ;发光剂的标记技术;发光剂的标记技术;发光剂的标记技术;影响标记的因素;第三节 化学发光免疫分析的类型 ;直接化学发光免疫分析;发光;;化学发光酶免疫分析;辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析;辣根过氧化物酶标记化学发光免疫分析示意图 ;碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析;碱性磷酸酶标记化学发光免疫分析示意图 ;分析步骤;电化学发光免疫分析;在电化学发光免疫分析系统中，磁性微粒为固相载体包被抗体(抗原)，用三联吡啶钌标记抗体(抗原)，在反应体系内待测标本与相应的抗原 (抗体)发生免疫反应后，形成磁性微粒包被抗体-待测抗原-三联吡啶钌标记抗体复合物，这时将上述复合物吸入流动室，同时引人TPA缓冲液。当磁性微粒流经电极表面时，被安装在电极下面的电磁铁吸引 住，而未结合的标记抗体和标本被缓冲液冲走。与此同时电极加压，启动电化学发光反应，使三联吡啶钌和TPA在电极表面进行电子转移，产生电化学发光，光的强???与待测抗原的浓度成正比。 ;电化学发光免疫分析示意图;电化学发光免疫测定示意图;标记磁颗粒在电场中发光工作示意图;;鲁米诺氧途径免疫分析;均相反应 反应的四个过程均具有放大效应 整个能量的产生、传递和放大过程十分稳定 可实现对多种生物分子的测定;第四节 化学发光免疫测定的临床应用;第四节 化学发光免疫测定的临床应用; 发光是指分子或原子中的电子吸收能量后，由基态跃迁到激发态，然后再返回到基态，并释放光子的过程。 化学发光是吸收了化学反应过程中所产生的化学能使分子激发而发光。 化学发光免疫分析是将化学发光与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的标记免疫分析技术，分为直接化学发光免疫分析，化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析。 ;1．什么是化学发光免疫分析？ 2．化学发光反应的条件？ 3．什么叫化学发光剂？化学发光剂必须具备那些条件？ 4．吖啶酯化学发光的原理和特点是什么？ 5．酶促反应的发光剂