反相高效液相色谱法同时测定马鞭草中乌索酸和齐墩果酸的含量.docVIP

　　反相高效液相色谱法同时测定马鞭草中乌索酸和齐墩果酸的含量 【摘要】 　　目的建立RP-HPLC法测定马鞭草中乌索酸和齐墩果酸的含量。方法色谱柱为Nucleosil C18柱（4.6 mm×250 mm, 5 μm），流动相为甲醇-水(88∶12, V/V)，流速为0.8 ml/min，检测波长为210 nm，柱温25℃。结果乌索酸在0.458～4.109 μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 7)，平均回收率为98.1 %，RSD=1.1%；齐墩果酸在0.156～1.389 μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 6)，平均回收率为101.7%，RSD=1.7%。结论方法快速简便、准确可靠，可作为马鞭草药材的质量控制方法。 【关键词】 马鞭草；乌索酸；齐墩果酸；反相高效液相色谱法 　　Abstract：ObjectiveTo establish a method for determining ursolic acid and oleanolic acid in Verbena officinalis L. by high performance liquid chromatography. MethodsThe separation n(4.6 mm×250 mm, 5 μm) ethanol-obile phase.The flol/min and the detection . The column ethod is rapid, simple, accurate and reliable and can be used for the quality control of Verbena officinalis L.． 　　Key pom×250 mm, 5 μl, 带保护柱)；流动相为甲醇-水（88∶12，V/V）；流速为0.8 ml/min；柱温为25 ℃；检测波长为210 nm；以《美国药典》方法 计算 ，乌索酸和齐墩果酸理论塔板数均大于10 000。乌索酸和齐墩果酸对照品及马鞭草样品的HPLC色谱见图1。 　　2.2 对照品溶液的配制精密称取干燥至恒重的乌索酸对照品 22.8 mg 和齐墩果酸对照品 7.8 mg ，置于 10 ml 容量瓶中，加入适量甲醇溶解，用甲醇定容，得对照品储备液。精密吸取1 ml混合液置10 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，混合均匀，制成乌索酸和齐墩果酸的浓度分别为 0.228 μg/μl 和 0.078 μg/μl 对照品混合溶液，备用。 　　2.3 样品溶液的制备将马鞭草样品置烘箱中 85℃ 烘干12 h，研细后精密称取约 4 g ，置于具塞三角烧瓶中，加入 10 倍量 95% 乙醇，采用超声法提取 60 min ，过滤，药渣洗涤两次，合并滤液于 50 ml容量瓶中，加乙醇定容至刻度，摇匀。滤液用 0.2 μm 的滤膜过滤，得马鞭草提取物的样品溶液。 　　2.4 线性关系实验分别精密吸取对照品的混合溶液2.0，6.0，10.0，14.0，18.0 μl进样分析，按选定的色谱条件进样并测定峰面积。以峰面积（μV·s）对进样量(μg)进行线性回归，乌索酸和齐墩果酸的回归线方程分别为： 　　YUA=5.18×105X-4.36×104（r=0.999 7） YOLA=6.21×105X-6.32×104（r=0.999 6） 表明当乌索酸进样量在0.458～4.109 μg，齐墩果酸进样量在0.156～1.389 μg范围内线性关系良好。 　　2.5 精密度实验精密吸取对照品混合溶液10 μl，重复进样5次，分别测定峰面积值， 计算 出乌索酸的RSD为0.9%，齐墩果酸的RSD为0.7%，进样方法和仪器精密度良好。 　　2.6 重复性实验取干燥至恒重的同一批马鞭草样品5份，按样品溶液制备方法制备样品溶液。精密吸取10 μl进样分析，乌索酸RSD为2.1%，齐墩果酸峰面积RSD为 2.3%。 　　2.7 加样回收率实验精密称取干燥至恒重、已知乌索酸和齐墩果酸含量的马鞭草样品5份，每份约4g，加入适量乌索酸和齐墩果酸对照品适量，5份样品同时按样品溶液制备方法提取，进样分析。乌索酸平均回收率为98.1%，RSD 1.1%，齐墩果酸平均回收率为101.7%，RSD 1.7%。 　　2.8 样品的含量测定精密吸取马鞭草样品溶液10 μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，外标法计算样品中乌索酸和齐墩果酸的含量。结果见表1。表1 马鞭草提取物中乌索酸和齐墩果酸含量（略） 　　3 讨论 　　3.1 提取方法从中草药中提取有效成分的常规方法主要有：热回流法、索氏法、煎煮法及渗滤法、冷热浸泡法等［4］ 。本文采用的超声提取法在提取过程中具有破坏植物药材细胞的作