苦参碱对小鼠免疫功能的影响.docVIP

　　苦参碱对小鼠免疫功能的影响 作者：尚智，丁涛，温富春，张伟，张殿文，纪凤兰，徐惠波 【摘要】 目的:观察苦参碱对小鼠脾淋巴细胞增殖和释放白细胞介素-2（IL-2）及腹腔巨噬细胞释放白细胞介素-1（IL-1）的影响。方法:溴化四唑蓝比色法测定脾淋巴细胞增殖，胸腺细胞增殖法和溴化四唑蓝比色法测定IL-1、IL-2活性。结果:苦参碱可明显抑制ConA和LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖及ConA诱导的小鼠脾细胞释放IL-2，对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞释放IL-1亦有一定的抑制作用。结论:苦参碱可抑制体外培养小鼠脾淋巴细胞增殖和释放IL-2及腹腔巨噬细胞释放IL-1。 【关键词】 苦参碱;免疫功能:淋巴细胞增殖;IL-1;IL-2 　　苦参碱Matrin是豆科槐属植物苦参Sophora fla-vescens Ait.，苦豆子S.AlopecuroidesL，广豆根S.Sub-prostrata Chun et T.Chen等中草药的活性成分。大量 　　2.2.2 IL-2活性的测定 　　常规法制备小鼠胸腺细胞悬液，加入96孔培养板，每孔50ul，使细胞终浓度为1×105 .ml，再加入终浓度为3μg.ml的ConA50ul及不同稀释度的待测样品100μl，以培养液作为阴性对照，置于37℃5%CO2 培养箱中培养24h后，每孔加入5mg.ml MTT10μl，继续培养4h，取出96孔板，1000r.min离心5min，弃上清，每孔加入DMSO150μl，置于微量振荡器上振荡10min，酶标仪570nm处测光吸收值A。吸光度大小反映IL-2活性的强弱［3］。 　　2.3 苦参碱体外对正常小鼠腹腔巨噬细胞释放IL-1的影响 　　2.3.1 IL-1的粗提 　　常规方法制备24孔板巨噬细胞单层，每孔加入终浓度为10ug.ml的LPS0.5ml，以激活巨噬细胞，同时每孔加入不同浓度的试药1ml，培养48h后收获上清，得诱生的IL-1粗品，-20℃保存待测［3］。 　　2.3.2 IL-1活性的测定 　　常规法制备107 /ml小鼠胸腺细胞悬液，加入96孔板，每孔0.1ml，同时加入不同稀释度的IL-1待测上清液0.1ml，终浓度为2μg.ml的ConA0.1ml，每个浓度5个复孔，以培养液作为阴性对照，置37℃5%CO2 培养箱中培养68h后，每孔加5mg.ml MTT10μl，继续培养4h，1000r.min离心5min，弃上清，每孔加入DMSO150μl，微量振荡器振荡10min，酶标仪570nm处测吸光度A值。吸光度大小反映IL-1活性的强弱［4、5］ 。 　　2.4 统计分析 　　采用SPSS10.0统计软件进行F检验和q检验。统计结果用（ˉx±s）表示。 　 　3 结果 　　3.1 对小鼠T、B淋巴细胞增殖的影响 　　见表1、表2。表1 体外对ConA非特异性刺激小鼠T淋巴细胞增殖的影响（略）注:与阴性对照组相比，*Plt;0.05，**Plt;0.01，***Plt;0.001。表2 体外对LPS非特异性刺激小鼠B淋巴细胞增殖的影响（略）注:与阴性对照组相比，*Plt;0.05，**Plt;0.01，***Plt;0.001 　　从表1可见苦参碱在0.5mg.ml、0.25mg.ml和0.05mg.ml3个浓度可明显抑制T淋巴细胞增殖，且呈剂量依赖关系。 从表2可见苦参碱在4个浓度均可明显抑制T淋巴细胞增殖，且呈剂量依赖关系。 　　3.2 体外对正常小鼠脾细胞释放IL-2的影响 　　见表3。 表3 体外对正常小鼠脾细胞释放IL-2的影响（略）注:与阴性对照组相比，*Plt;0.05，**Plt;0.01，***Plt;0.001 从表3可见苦参碱在0.5mg.ml，0.25mg.ml和0.05mg.ml3个浓度可明显抑制脾细胞释放IL-2，且呈剂量依赖关系。 　　3.3 体外对正常小鼠腹腔巨噬细胞释放IL-1的影响 　　见表4。表4 体外对正常小鼠腹腔巨噬细胞细胞释放IL-1的影响（略）注:与阴性对照组相比，*Plt;0.05，**Plt;0.01，***Plt;0.001。 　　从表4可见苦参碱在0.25mg.ml浓度可明显抑制脾细胞释放IL-2，在其它浓度亦呈抑制趋势，但未见明显差异。 　　 4 讨论 　　近年来，苦参碱作为免疫抑制药物在临床中应用较多，多用于 治疗 病毒性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤等疾病。但对苦参碱免疫抑制作用的体外实验报道较少。淋巴细胞是机体的重要免疫细胞，淋巴细胞转化实验是检测淋巴细胞增殖活性的一种有效的方法，常用于评价药物对机体免疫功能的影响。腹腔巨噬细胞是机体免疫系统的另一重要免疫细胞，是主要的抗原提呈细胞，且具有很强的吞噬功能，在特