蛋白脂质微粒体Saposin Cdops能增强小鼠免疫功能.docVIP

　　蛋白脂质微粒体Saposin Cdops能增强小鼠免疫功能 作者：赵树立,赵光锋,路洪娜,祁晓阳,侯亚义 【摘要】 目的： 研究 新型抗肿瘤药Saposin Cdops对小鼠免疫功能的 影响 。 方法 ：采用实效药量及其10倍药量的Saposin Cdops给雌性B6小鼠进行连续7 d腹腔注射给药后，检测小鼠脾脏中与肿瘤免疫相关的免疫细胞、血清中的细胞因子和IgG含量的变化，从而判断其在正常药量和超量情况下对健康小鼠免疫力的影响。结果：Saposin Cdops在正常用药量情况下对小鼠免疫功能有显著激活效应，这种激活效应不是剂量依赖的，而且在超量 应用 的情况下对小鼠免疫功能不产生负面影响。结论：Saposin Cdops具有免疫激活剂的作用，能增强小鼠的免疫功能。 【关键词】 Saposin Cdops； 肿瘤免疫； 免疫激活； 小鼠 Saposin Cdops(缩写为Sapcdops)是新近发明的一种具有肿瘤靶向性 治疗 作用的候选药物，它是由一种鞘脂激活蛋白(sphingolipid activator protEin，Saposin)C和二油基磷脂酰丝氨酸（DOPS）组成的蛋白脂质微粒体。Saposin是存在于溶酶体中的一种激活蛋白，包括A、B、C和D 4类成员，这类蛋白都能与细胞膜上的磷脂结构结合［14］。其中，Saposin C具有独特的性质，即在酸性条件下，很低浓度(nmol) 的Saposin C即可与细胞膜上的阴离子不饱和磷脂成分融合［56］。体内肿瘤细胞生长速度快，需氧量大，二氧化碳排放量也大，致使肿瘤微环境呈酸性［7］。根据Saposin C和肿瘤微环境的特性，我们以往研制的Sapcdops蛋白脂质微粒体能特异地与肿瘤细胞膜结合，并引起肿瘤细胞膜磷脂双分子层的重新排列，特异性抑制其增殖或杀伤肿瘤（癌）细胞，而不影响正常细胞的生长［8］。有报道，Sapcdops对50多种人体肿瘤细胞株和多种癌细胞的裸鼠移植瘤具有明显的杀伤和抑制效应，对正常细胞没有不良影响［911］。 不过，许多蛋白脂质微粒体都具有影响免疫功能的作用，Sapcdops是一种蛋白脂质微粒体，在靶向性杀伤肿瘤细胞的同时，它对机体本身免疫功能的影响尚未见到相关报道。为此，本实验采用健康的B6小鼠，对其予Sapcdops处理， 分析 调节性T细胞（Treg细胞）、树突状细胞（DC细胞）、天然杀伤细胞（NK细胞）、CD8+T细胞等以及血清中相关的细胞因子、IgG含量的变化，为Sapcdops候选药物进入临床实验提供相应的免疫学资料。 1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 实验动物 4～6周龄B6小鼠24只，体重18～22 g，雌性,购自扬州大学比较医学中心。实验进行前,动物在室内至少饲养1周,均用颗粒饲料喂养在(21±2)℃的环境中,自由摄食和饮水。 1.1.2 试剂 Sapcdops系江苏常州长吉生物技术开发有限公司研制，CD3PECY5.5、CD8RPE、NK1.1APC、CD11CPE、CD4FITC、CD25APC和FoxP3PE抗体均购自美国的eBioscience公司，鼠TGFβ、TNFα、IFNγ的ELISA检测试剂盒购自美国Biosource公司，鼠血清IgG定量检测试剂盒购自美国Bethyl公司。 1.2 方法 1.2.1 动物试验 24只动物分为对照组（PBS组）、正常剂量（20 mg·kg－1·只－1）组及超剂量(200 mg·kg－1·只－1）组3组,每组8只。所需剂量参照我们前期实验的结果。Sapcdops用灭菌的PBS稀释，每天腹腔注射1次（每组给药体积均为0.1 ml），连续注射1周,每天1次。 1.2.2 血清收集 小鼠眼眶采血，4 ℃静置过夜后，3 500 r·min－1离心15 min，取血清，分装，-20 ℃保存。 1.2.3 脾脏细胞的分离［12］ 小鼠眼眶采血后脱颈椎处死，放入75%的酒精灭菌10 min，在超净工作台内取小鼠脾脏，用镊子拉碎，200目筛网过滤,注射器反复推拉以便打散细胞，离心（4 ℃，1 500 r·min－1，5 min）,加入ACK红细胞裂解液处理后，室温静置5 min，离心(4 ℃，1 500 r·min－1,5 min)，再用5 ml预冷的PBS洗涤2次。 1.2.4 流式细胞术检测脾脏中各免疫细胞的成分［13］ 脾脏细胞离心后用1 ml PBS重悬，取80 μl按照说明书分别加入相应的标记抗体，NK细胞用CD3PECY5.5/NK1.1APC抗体，DC细胞用CD11CPE抗体，T细胞用CD3PECY5.5/CD8RPE，Treg细胞用CD4FITC、CD25