遗传学实验一.docVIP

《遗传学实验》 实验一 植物细胞的有丝分裂染色体标本制片及观察 一、实验目的 1.观察植物细胞有丝分裂过程中染色体的形态和变化。 2.学会植物根尖有丝分裂装片的制作方法和技巧。 二、实验原理 背景知识介绍： 1882年，德国生物学家费莱明（Walther Flemming）发现了有丝分裂现象；但从更详细的一些资料看，认识有丝分裂过程是人们在不断地对比和总结中获得的。 ——1841年，波兰生物学家Robert Remak）发现一个母细胞可分裂为两个子细胞； ——1842年，瑞士植物学家内格里（Karl Wilhelm vonnageli ）观察到 分裂期的染色体结构。 ——1848年，德国生物学家霍夫曼斯特（Wilhelm Hofmeister）发现了分裂期核膜消失现象。 ——1877-1882年，费莱明提出了分裂期染色体“纵向分裂”模式，并用“mitosis”表示整个细胞分裂的过程。 ——1884年，波兰——德国植物学家斯觉斯伯格（Eduard Strasburger）用“prophase”、“metaphase”和“anaphase”表示分裂期中的前期、中期和后期。 ——1894年，德国解剖学家伦德加德（Henrik Lundegardh）用“interphase”表示分裂间期。 -至此，有丝分裂全过程就被认为划分为前期、中期、后期、末期和间期5个时期，有丝分裂全过程的描述得到了统一。 有丝分裂的过程： 间期：包括G1、S、G2期。 G1期，合成细胞生长必需的蛋白质、糖类和脂质等生化物质；染色质去凝集，为DNA合成做准备，因此又称DNA合成预备期或复制前期。有些细胞暂时离开了细胞周期进入G0期，停止分裂；一旦得到信号指令便又会返回细胞周期，分裂增殖。G0期细胞多发生于G1期，人体绝大多数细胞是处于G0期。像肝细胞，当它受到外部因素刺激后，如切割掉部分肝，便可使细胞从G0期返回到细胞周期中。 S期，DNA复制，组蛋白合成，复制后两份DNA分子在S期货或S期后不久，通过黏结蛋白（cohesion）相互黏合。 G2期，RNA和蛋白质合成，特别是微管蛋白大量合成，为M期纺锤体装配提供原材料。 同种细胞，细胞周期时间长短因生理活动、营养状况等差异而有所不同，不同种类细胞之间，细胞周期时间短的差别很大，主要是G1期不同，而S期、G2期和M期时间相对恒定，尤其是M期更为恒定，常仅维持0.5小时。 在蚕豆根尖细胞的有丝分裂周期中，G1期为5hr，S期为7.5hr，G2期为5hr，间期共长17.5hr，而M期全长只有2hr 。 前期(prophase) 当染色体呈可见的细线时标志着细胞分裂开始，进入细胞分裂前期。 ●每个染色体两条染色单体开始螺旋化、卷曲； ●着丝粒尚未分裂，因而螺旋、卷曲的两条染色单体由同一个着丝粒联结； ●核仁、核膜逐渐解体，前期结束时核仁消失。 中期(metaphase) 标志:核仁、核膜消失 ●染色单体进一步螺旋、收缩直至呈最短、最粗的状态; ●纺锤丝形成一个三维的结构，称为纺锤体(spindle)； ●纺锤丝与染色体的着丝点附着，并牵引染色体，使其着丝粒均匀分成在垂直于两极的一个平面上(赤道板或赤道面)染色体臂自由分布在赤道面的两侧。 ●染色体形态稳定，排列均匀，是研究染色体形态和数目的最佳时期。 后期(anaphase) 后期就是从着丝粒分裂到染色单体到达两极的过程。 ●由于纺锤丝的牵引作用，着丝粒发生分裂； ●每条染色体的两条染色单体，分别由纺锤丝拉向两极； ●两极都具有相同的染色(单)体数。 末期(telophase) 染色体到达两极后: ●核膜、核仁重建； ●染色体解螺旋化，呈松散状态； ●细胞质分裂，细胞板形成。 植物根尖的分生细胞的有丝分裂，每天都有分裂高峰时间，此时把根尖固定，经过染色和压片，再置放在显微镜下观察，可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。 三、实验材料 ?蚕豆(Vicia faba 2n=12) 洋葱（Aillum cepa 2n=16） 大蒜 玉米 四、实验器具和药品 1.用具：显微镜、载玻片，盖玻片，指管，试剂瓶，滴瓶，镊子，解剖针，滤纸、铅笔、橡皮等。 2.药品：无水酒精，95%酒精、80%酒精、70％酒精，冰醋酸，1N盐酸、1%醋酸洋红、铁矾（硫酸亚铁）、对二氯苯或秋水仙素、α-溴萘、8-羟基喹啉。 3.试剂配制 卡诺固定液的配制：用3份无水酒精，加入1份冰醋酸（现配现用）。 染色液的配制： 1%的醋酸洋红染色液：将100ml45%的乙酸加热煮沸，移去火苗，徐徐加入1-2g洋红，溶解后再煮沸1-2min，