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7、肌苷酸的提取工艺：离子交换树脂法 （1）工艺流程 发酵液 过滤 酸化pH1.5 阳离子树脂吸附 流出液碱化pH9.5 减压浓缩 结晶 溶解 重结晶 阴离子树脂吸附 洗脱 肌苷酸精品 盐酸 732#（H＋）型 NaOH 717#（OH－）型 0.05mol/LHCl 0.05ml/LNaCl 95％乙醇 * （2）提取工艺说明 过滤、酸化：发酵液加活性白土（15g/L)，压滤除菌体，清液加1.5倍体积的0.1mol/LHCl。 阳离子交换： 732#（H＋）型树脂，上柱液体积为湿树脂体积的6倍。流出液用NaOH溶液调pH8.5-9.5。 阴离子交换：上柱液体积为湿树脂体积的6倍，90％肌苷酸被吸附。 洗脱：先用水冲洗柱子，再用0.05mol/LHCl洗涤至流出液pH为3.5；然后用含0.05mol/LHCl和0.05mol/LNaCl混合液进行洗脱。收集肌苷酸流出液。 减压浓缩：将洗脱液用40％NaOH调pH至7.5，减压浓缩15－20倍体积。 结晶：浓缩液加入2倍体积的95％乙醇，低温育晶，析出肌苷酸粗品。 重结晶：肌苷酸粗品加水溶解，加乙醇低温结晶，过滤，晶体用30％乙醇洗涤2－3次 肌苷酸精品：湿肌苷酸晶体烘干，制得肌苷酸精品。 * * * 二、鸟苷（GMP）： 1960年日本又发现5′-鸟苷酸的呈味效果，继而发现呈味核苷酸与谷氨酸钠（味精）并用时，对谷氨酸钠具有强烈的助鲜效果。此后不久，日本对5′-肌苷酸和5′-鸟苷酸进行工业化生产，80年代年产量已达4000 吨左右。中国目前年产5′-肌苷酸和5′-鸟苷酸能力为50～80吨。 无色至白色结晶或结晶性粉末。水溶液在pH值2～14范围内稳定。加热30～60min几乎无变化，250℃时分解。 ?? 5-鸟苷酸二钠有特殊香菇滋味，鲜味程度约为肌苷酸钠的三倍以上，5-鸟苷酸二钠常与谷氨酸钠配合使用(加入量1%～5％)，有十分明显的增鲜作用。亦与肌苷酸二钠混合配制成呈味核苷酸二钠，作混合味精用。 §3 核酸类物质生产各论 * 1、鸟苷酸的代谢调控及发酵机制 PRPP PRA 5,-IMP AMP GMP ADP SAMP XMP 枯草芽孢杆菌嘌呤核苷酸生物合成调节机制 反馈抑制 反馈阻遏 IR * 嘌呤核苷酸生物合成途径的关键酶： PRPP转酰胺酶、IMP脱氢酶和SAMP合成酶。 PRPP转酰胺酶被AMP、ADP完全反馈抑制，IMP、GMP、XMP、ATP对其抑制较弱 肌苷酸脱氢酶受GMP系物质的反馈阻遏。其次受ATP、XMP、GTP的反馈抑制。 在枯草芽孢杆菌中，GMP合成中的专一性酶（IMP脱氢酶）仅受GMP系物质的反馈阻遏。 从IMP合成AMP、GMP。倾向于优先合成GMP。 * 2、GMP发酵应具备的条件： 因枯草芽孢杆菌具有GMP的环形支路： 菌株因丧失SAMP合成酶（Ade－）活性，切断从IMP到AMP的通路，使生成的IMP全部转向合成GMP，同时丧失GMP还原酶活性，使生成的GMP不致还原为IMP。 为了积累鸟苷，核苷酶或核苷磷酸化酶等鸟苷分解酶的活性必须微弱； 鸟苷酸（GMP）是嘌呤核苷酸全合成的终产物，为了积累鸟苷，必须解除GMP对PRPP转胺酰酶，IMP脱氢酶及GMP合成酶等的反馈抑制与阻遏。（封闭基因或选择渗漏） 为了抑制肌苷产生，高效率积累鸟苷，由IMP脱氢酶及GMP所催化的反应应该比核苷酸酶（IMP---IR)所催化的反应优先进行。 * 3、鸟苷的产生菌 枯草芽孢杆菌、产氨短杆菌、微黄短杆菌、铜绿假单孢菌都能产鸟苷。其中枯草芽孢杆菌代谢途径清晰，一般作为选育鸟苷高产菌株的出发菌株。 鸟苷酸的助鲜作用比肌苷酸更强。直接发酵糖质原料或利用鸟嘌呤作前体都能得到鸟苷酸。 GMP工业生产多用发酵法先制成鸟苷，然后通过微生物或化学磷酸化作用转变为 GMP。生产鸟苷采用的菌种有枯草杆菌、短小芽孢杆菌、产氨短杆菌的多种变异株，它们的特点是生成必需嘌呤碱基并对嘌呤结构类似物具有抗性，各菌株的鸟苷生成量达10克/升左右。?? * 4、鸟苷的发酵工艺1、工艺流程 试管斜面培养 摇瓶种子培养 二级种子罐培养 三级种子罐培养 发酵 板框压滤 脱色 活性碳吸附 低温结晶 精制 * （2）操作说明 培养基：鸟苷酸发酵采用的都是营养缺陷型菌株，培养基中除碳源、氮源和无机盐等基本成分，还需添加菌株所需的必需营养物质。 （1）碳源：葡萄糖或麦芽糖，10－12％，流加补糖。 （2）氮源：（NH4）2SO4或NH4Cl，初始浓度2％，发酵过程中流加氨水补充氮源和调解pH。 （3）无机盐：磷酸盐、镁盐、铁盐、锰盐。 （4）嘌呤前体物：L-谷氨酸钠等氨基酸。 （5）营养缺陷