核酸的提.pptVIP

§5.4动物脏器核酸的提取分离方法 核酸及其衍生物类药物，属天然大分子，结构复杂→采用生物材料为原料的提取法制造 核苷酸类及其衍生物，小分子，结构简单→化学合成法 一、RNA的提取分离 动物组织捣碎→匀浆→0.14mol/L NaCl 溶液提取→调pH至4.5，RNA.蛋白↓，RNA与蛋白质分开的方法： 1）乙醇沉淀法 2）盐酸胍和去污剂分离法 3）酚法 * 二、DNA的提取分离 利用核糖核蛋白在0.14mol/L NaCl可溶，而DNA核蛋白则可溶于水或高浓度的盐溶液（ 1mol/L NaCl ） 组织捣碎→ 0.14mol/L NaCl反复洗涤以去除RNA（或0.1mol/L NaCl＋ 0.05mol/L NaCl 枸橼酸钠）→去污剂SDS使蛋白质变性→沉淀用1mol/L NaCl溶解→乙醇沉淀→去污剂精制，反复多次 常用去蛋白方法：含有新醇或异戊醇的氯仿沉淀核蛋白→离心；SDS；苯酚处理，离心分层 提取核酸时要注意保持其完整性（防过酸、碱、低温） * §5.5 转移因子的制备 Transfer factor （TF）一种多核苷酸和多肽小分子物质，为细胞免疫促进剂。可将供体的细胞免疫性转移给受体正常的淋巴细胞，并能促进释放干扰素。 临床用于免疫缺陷的病人，如感染、疱疹、乙肝、麻疹等。对恶性肿瘤可作为辅助治疗剂；作用无种属特异性 。 制备TF的原料除特异性供体白细胞外，一般采用正常人血液、脾和扁桃体等原料 提取工艺中主要采用透析、柱层析、超滤及加絮凝剂和助滤剂再过滤等 * §5.6 辅酶A的提取 辅酶A（Coenzyme A，CoA），是由等分子的泛酸、腺嘌呤、核糖、氨基乙硫醇和三分子磷酸构成，ADP的衍生物或类似物，相对分子量为767.54 主要起传递酰基的作用，来回接受和放出酰基，携带酰基的部位在－SH上→以HSCoA表示 对糖、脂类和蛋白质的代谢具有非常重要的影响， 作为白细胞减少症、原发性血小板减少性紫癜、功能性低热、脂肪肝、各种肝炎、冠状动脉硬化、心急梗塞等疾病的重要辅助药物 * §5.6 辅酶A的提取 分离过程：预处理→提取→除蛋白→CMA树脂纯化→LD-601大孔吸附剂二次纯化→浓缩、沉淀、干燥 工艺过程中CoA的定性跟踪方法：硝基盐巯基显色法（CoA分子上的巯基能与亚硝基铁氰化物产生不稳定的强烈红色） 定量检测方法：磺胺乙酰化法和磷酸转乙酰化酶（PTA）紫外分光光度法 一般工艺制得的CoA制剂，有氧化型和还原型两种成分，磺胺乙酰化法测得的是制剂中CoA的总效价 * §5.8 从啤酒酵母中提取RNA 工业制取RNA主要从啤酒酵母、面包酵母、酒精酵母、白地霉和青霉菌等 以上菌株中的核酸大部分是RNA，而DNA的量很少，只要将菌体分离后经RNA抽提后即可→废弃酵母泥提取核酸（即可增加经济效益，又可解决饲料酵母存在高核问题） 常用工业方法：稀碱法、浓盐法和自溶法，氨法破壁→RNA从细胞中释放，在进行提取、沉淀和纯化 * 啤酒酵母中RNA的提取工艺 破胞（1倍体积的1％稀碱、8－10％的浓盐或1％的氨水）→离心分离得上清→调等电点2－2.5→离心分离取沉淀→脱水干燥 基于被淘汰的啤酒酵母菌龄较老，蛋白含量高而核酸含量较低→常用得的一次沉淀技术难以获得高纯度的优质核酸→先调蛋白质等电点（pH4.2）除杂蛋白，再调至核酸等电点2左右 RNA含量测定：紫外分光光度法、定磷法 * 生化工艺学课件第五章 核酸的提取分离 * 第五章 核酸的提取分离 §5.1 概述 §5.2 核酸的理化性质 §5.3 核酸的作用与用途 §5.4 动物脏器核酸的提取分离方法 §5.5 转移因子的制备 §5.6 辅酶A的提取 §5.7 复合辅酶的提取 §5.8 从啤酒酵母中提取RNA * §5.1 概述 核 酸（nucleic acid) 核苷酸(nucleotide) 磷酸 (phosphoric acid) 核苷(nucleoside) 戊糖(pentose) 碱基(base) * 组成核苷酸的碱基 * Fig. 2-4 The primary structure of DNA. * 脱氧核糖核酸（DNA）主要存在于细胞核的染色体中，核糖核酸（RNA）主要存在于细胞的微粒体中，各种生物体含有核酸的多少不同 应用于临床的核酸及其衍生物类生化产品越来越多 我国人工合成丙氨酸转移核糖核酸，76个核苷酸，与天然酵母丙氨酸核糖核酸具有相同的化学结构，有接受丙氨酸、将携带的丙氨酸掺入到蛋白质中的生物活力 * 呈味核苷酸是目前国际上流行的新型鲜味剂，其学名为5－IMP（肌苷酸钠）、5－GMP（鸟苷酸钠）、I＋G（50％IMP＋50GMP）， 我国第三代鲜味剂鸡精的特点为：由鸡肉、鸡蛋、呈味核苷酸、水解蛋白粉、味精及多种调味料