毛细管电泳-非接触式电导分离检测食品中天然.pptVIP

Na2HPO4 Na2HPO4 +硼砂 NaOH Na2HPO4 +硼砂+CTAB Na2HPO4 ＋NaOH NaOH＋Na2HPO4 ＋CTAB NaOH＋Na2HPO4 ＋CTAB体系 基线平稳，信噪比高，分离度和灵敏度最佳。 电泳运行液的选择 * NaOH浓度的影响 √ 结论：10mmol/L NaOH分离效果好，出峰快。 浓度太小，糖被络合得不完全 迁移时间提前，峰形宽钝 浓度太大时，峰形变得尖锐 但基线不稳，分离度也下降 考察了NaOH浓度分别为 6mmol/L 8mmol/L 10mmol/L 12mmol/L 14mmol/L 16mmol/L 对三种糖的分离情况 * Na2HPO4的影响 浓度过低时，糖被络合得不够完全，体系的离子强度太小 反映在电导上，就会导致信号强度过小，难以检出 浓度过高时，过量的负离子会干扰络合离子， 体系离子强度过大，会导致基线不稳，同样不利于分离。 考察了Na2HPO4浓度分别为 1.5mmol/L -----检不出果糖 3.5mmol/L-----基线平稳，分离效果较好 5.5mmol/L-----基线不平稳，峰形较宽，分离度不好 √ * 电渗流改进剂（CTAB)的影响 CTAB是电渗流改向剂。 添加CTAB，可以减少电渗流， 能在阳极端有效地检测被测组分离子。 CTAB的加入量200?mol/L为最佳。 * 12kV 结论：电压较低，分离度增大，灵敏度高，但分离时间较长；加大分离电压，可缩短迁移时间，峰形尖锐，但灵敏度降低。 因此，本实验选定分离电压为：-12kV。 分离电压的确定 * 进样时间的确定 进样时间影响进样量的大小，也是影响分离效果的重要因素。 3S 5S 7S 9S 11S ｝ 考察了进样时间的影响，结果如下： ｝ 进样太少，达不到检测灵敏度，出峰不明显 进样量太大，出现拖峰现象，峰形重叠 √ 分离度最好 * 分离电压的确定 考察了分离电压的影响，结果如下： -6KV -12KV -16KV 峰形宽钝，且出峰时间延长 出峰较快； 体系不稳定，迁移时间提前 √ * 最佳实验条件的确定 NaOH 10mmol/L Na2HPO4 3.5mmol/L CTAB 0.2mmol/L 分离电压 -12.0kV 进样电压 -10.0kV 进样时间 7s * 糖的种类 回归方程 相关系数 线性范围 （mmol/L） 检测限 （mmol/L） 果糖 葡萄糖 蔗糖 y=5.8+802.6x y=13.3+877.6x y=6.9+126.5x 0.9997 0.9991 0.9998 0.1 ~ 50.0 0.08 ~ 30.0 1.3 ~ 90.0 0.03 0.02 0.3 线性范围与检测限 葡萄糖 果糖 蔗糖 * 表2 果糖、葡萄糖、蔗糖的重现性测定 重现性测定 序号 1 2 3 4 5 6 RSD/% 果糖峰高面积 果糖迁移时间（min） 葡萄糖峰面积 葡萄糖迁移时间（min） 蔗糖峰面积 蔗糖迁移时间（min） 412 8.3 307 8.5 331 9.0 410 8.3 307 8.6 333 9.0 405 8.1 296 8.4 347 8.9 412 8.3 295 8.5 350 8.7 402 8.2 286 8.4 336 8.6 420 8.1 303 8.5 343 9.0 1.5 1.1 2.7 0.9 2.4 1.8 * 2.3.1 “零度”可口可乐样品 实际样品测定 样品名 果糖（g/100mL） 葡萄糖（g/100mL） 蔗糖（g/100mL） 零度可口可乐 未检出 未检出 未检出 图8 “零度可口可乐”饮料的毛细管电泳谱图 * 2.3.2 可口可乐样品 样品名 果糖（g/100mL） 葡萄糖（g/100mL） 蔗糖（g/100mL） 可口可乐 1.19 1.07 0.75 图6 “可口可乐”饮料的毛细管电泳谱图 1：果糖 2：葡萄糖 3：蔗糖 * 2.3.2 王老吉样品 样品名 果糖（g/100mL） 葡萄糖（g/100mL） 蔗糖（g/100mL） 王老吉 未检出 未检出 1.94 图7 “王老吉”饮料的毛细管电泳谱图 1：蔗糖 * 2.3.2 雪碧样品 样品名 果糖 （g/100mL） 葡萄糖（g/100mL） 蔗糖（g/100mL） 雪碧 1.35 1.35 1.26 图9 “雪碧”饮料的毛细管电泳谱图 1：果糖； 2：葡萄糖；3：蔗糖 * 2.3.3 荔枝样品 样品名 果糖 g/100g 葡萄糖 g/100g 蔗糖 g/100g 荔枝 未检出