游离亚油酸对胰腺腺泡细胞的影响及其机制的探讨.docVIP

　　游离亚油酸对胰腺腺泡细胞的影响及其机制的探讨 作者：王亚军 孙家邦 李非 孙海晨　 【摘要】 目的 探讨游离亚油酸对胰腺腺泡细胞的 影响 及其可能的机制。 方法 分离胰腺腺泡细胞，分别与0.1、0.5、1.0 mmol/L亚油酸共同孵育30、60、90 min，测定细胞的LDH释放率，DNA片段梯度 分析 腺泡细胞凋亡，流式细胞仪测定细胞凋亡率，ethods Pancreatic acinar cells from adult rats mol/L, 0.5 mmol/L and 1.0 mmol/L for 30, 60 and 90 minutes respectively to measure the LDH release rate of acinar cells. DNA ladder analysis etry to determine apoptosis rate, ) to observe intracellular calcium changes. Results After incubation aged, e and dosedependent fashion ed by agarose gel electrophoresis mol/L linoleic acid, as proved apoptosis of acinar cells. Also, acinar cell apoptosis rate and PKC membrane translocation level e and dosedependent fashion. In addition, intracellular calcium existed at a dosedependent fashion aging acinar cell is dependently related to dose and time. Free fatty acid stimulating increase of intracellular calcium and activation of PKC inducing apoptosis is one of pathogeic mechanisms of hyperlipaemic pancreatitis. 【Key 高脂血症是继胆石和酒精之后急性胰腺炎(acute pancreatitis，AP)的又一常见病因。 目前 还没有可以用来 研究 高脂血症诱导AP理想的动物模型， 高脂血症引起AP的机制仍不清楚。高脂血症的胰腺毒性主要源于甘油三酯(Triglyceride,TG)分解产物游离脂肪酸(Free fatty acid, FFA)的毒性。近年来，已有FFA通过激活细胞内蛋白激酶C(Protein kinase C,PKC)调控胰岛素的分泌或诱导胰腺内分泌细胞凋亡造成2型糖尿病的报道［1］。亚油酸是TG中常见不饱和FFA，因此，探讨亚油酸对胰腺腺泡细胞损伤的可能机制，对AP的诊治有着重要的意义。 1 材料与方法 1.1 动物及主要试剂 雄性SD大鼠(200～250 g)购自军事医学 科学 院实验动物中心；大豆蛋白酶抑制剂、胶原酶Ⅺ、透明质酸酶Ⅱ、亚油酸、PKC抗体等均为美国Sigma公司产品；Fluo3/AM购自美国BioRad公司。 1.2 方法与步骤 1.2.1 胰腺腺泡细胞的分离和分组 参照 2.2 LDH释放率 用不同浓度亚油酸作用胰腺腺泡细胞后台盼蓝染色观察，部分腺泡细胞出现蓝染，证明存在细胞损伤。LDH的释放率可以反映腺泡细胞损伤的严重程度，LDH的释放率与亚油酸剂量和作用时间呈依赖关系。见图1。 图1 亚油酸诱导腺泡细胞损伤呈时间剂量依赖效应，LDH反映细胞损伤的程度 a：Plt;0.001，b：Plt;0.05，与对照组比较 2.3 腺泡细胞DNA片段化 为了证实亚油酸对胰腺细胞的毒性，是否为通过诱导细胞凋亡而引起的，进一步行琼脂糖凝胶电泳DNA ladder的检测。DNA ladder检测结果，1.0 mmol/L亚油酸作用60 min出现清晰的DNA梯状条带，从而证明了随着亚油酸浓度的增高可以诱导细胞凋亡。见图2。 图2 亚油酸诱导胰腺腺泡细胞凋亡出现DNA梯状条带 1： 对照组； 2： FFA 0.1 mmol/L； 3： FFA 0.5 mmol/L； 4： FFA 1.0 mmol/L 2.4 亚油酸对腺泡细胞凋亡的 影响 为了证实亚油酸的胰腺腺泡细胞毒性与诱导细胞凋亡的关系，用碘化丙碇对细胞DNA进行染色，流式细胞仪检测。实验结果表明腺泡细胞的凋亡率与亚油酸呈剂量和作用时间依赖关系。见图3。 图3