白首乌粗多糖对酒精性肝损伤的保护作用研究.docVIP

　　白首乌粗多糖对酒精性肝损伤的保护作用研究 作者：杨小红， 袁江，周远明， 张瑜， 曾亚翎， 刘谋治， 赵冰清 【摘要】 目的探讨白首乌（耳叶牛皮消Cynanchum auriculatum Royle ex ethodsIn this experiment,rough polysaccharide from Bai Shou al control groups,model control group, positive control group and three experiment groups.Each experiment group had 14 mice and g/(kg·d),middle-dosage of 250 mg/(kg·d) and log/(kg·d),e volume of physiological saline.The concentration of the serum GPT/ALT and GOT/AST easured by extracting the eyeball blood.ResultsThe activity of the serum GPT/ALT and GOT/AST in the experiment group decreased more significantly than that in model control group,and the differences Cynanchum auriculatum Royle ex ice. 　　Key auriculatum Royle ex auriculatum Royle ex .)Hemsl和戟叶牛皮消Cynanchum bungEi Dee.的块根，具有养血益肝、固肾益精、乌须黑发和延年益寿的功效［1，2］。 现代 研究发现白首乌中含有多种有效成分，具有抗肿瘤、抗衰老和保肝等多方面的药理活性［1，3］。国外的研究也证实了这些药理活性［4～6］。 　 　1 器材 　　1.1 药品与试剂 　　白首乌购自江苏滨海，经湖南省药检所方石林教授鉴定为萝摩科植物耳叶牛皮消Cynanchum auriculatum Royle ex Royle ex l乙醇(85%),加热回流1 h，过滤，滤渣于恒温箱中80℃干燥过夜［2］，得淡黄色滤渣52.5 g。 　　2.1.2 初多糖的提取浸提 　　将黄色滤渣52.5 g均分于两个1 000 ml圆底烧瓶中,A瓶为26.2 g，B瓶为26.3 g。A、B瓶各加520 ml水,在恒温水浴中回流1 h，过滤，滤渣在相同条件下重复浸提1次，合并滤液。 　　离心：将两次浸液离心机离心10 min(2 500 r/min)，合并滤液。 　　减压浓缩：将合并滤液在真空旋转蒸发器中浓缩至75 ml。 　　真空干燥：在浓缩后的多糖溶液中加入3倍量95％乙醇（AR）225 ml，抽滤，真空干燥后得淡黄色粗多糖。 　　2.2 粗多糖的纯化 　　2.2.1 脱蛋白 　　粗多糖加蒸馏水200 ml复溶后经过Sevag试剂(氯仿20 ml，正丁醇4 ml)除蛋白，连续操作4次,得150 ml多糖溶液。 　　2.2.2 醇沉 　　在脱蛋白后的多糖溶液中加入3倍95％乙醇，沉淀用乙醇洗涤3次，经抽滤、真空干燥后得到浅灰色粉末状结晶。 　　2.2.3 纯化 　　将灰白色结晶用乙醇、丙酮及乙醚反复洗涤，抽滤、真空干燥后得到浅灰色粉末状结晶。 　　2.3 多糖的验证 　　2.3.1 多糖检测反应 　　取多糖粉末少许用蒸馏水溶解，取1 ml于试管中，再加10% α-萘酚的乙醇溶液3滴，均匀混合，沿管壁加浓硫酸1 ml，使集于下层，在两层交界面有棕色环出现，证明此为多糖。 　　2.3.2 水解 　　取上述粉末20 mg置锥形瓶内，加入2 mol／L的硫酸甲醇溶液2 ml，封口，置85℃水浴中水解24 h，冷却，用饱和Ba(OH)2中和，离心，取上清液，减压浓缩至干，待用。 　　2.3.3 单糖组分的纸色谱层析 　　用微量点样器分别取样品水解液和标准葡萄糖液各4～5 μl，在纸色谱上点样，置于展开筒中展开，展开系统为:正丁醇∶醋酸∶水(4∶1∶5) 上层, 自然 风干后用邻苯二甲酸苯胺显色，样品水解液出现4个棕色点，如图1，其中有一个点与标准葡萄糖溶液的点Rf值一样,说明样品中确含多糖。 　　2.4 药理实验 　　2.4.1 动物分组 　　取84只ICR健康小鼠（雌雄各半），随机分为6组，分别为正常对照组、模型组、阳性对照组，多糖低、中、高剂量给药组(500，250，100 mg/kg)。 　　2.4.2 给药 　　实验室适应性饲养7 d后，浏阳河酒灌胃0.5 ml/只