弓形虫Real-time PCR检测方法的建立和初步应用.pdfVIP

.20. Animal Husbandry Veterinary Medicine 2011 VoL 43 No. 12 弓形虫 Real-time PCR 检测方法的 建立和初步应用 菌智兵1 ， 2 ，张厚双2 ，曹 杰2 ，周勇志2 ， 张彦雷2 ，李国清l\ 周金林2* (1.华南农业大学兽医学院，广东广州 51侃42; 2. 中国农业科学院上海兽阪研究所，上海 2∞241) 摘要:根据已发表的号形虫529 bp 高拷贝序列，设计特异性引物相探针，建立TaqMan 探针法的实时荧光定量陀R 检测方法。将该方法用于3ω 份l临床样本的检测，并与常规PCR 和环介导等温扩增(LAMP) 技术进行对比分析。结果表明: ReaI -time PCR 检测的阳性率(11. 11%) 高于 LAMP (7.5%) 和常规PCR (3.61%) 。采用本实验繁建茫的 Real-time PCR，对收集于不同地区4 种动物的750 份临床样本检测发现.不同种类 动物血液样本中均可检测到弓形虫感染，其中芋的感染率最高 (17.8%) ，猪次之 (4.22%) ，牛较低(1. 98%) ，犬最低(1. 37%) 。 关键词:弓形虫;荧光实时定量 PCR; I临床样本 中图分类号: S852. 7 文献标识码:A 文章编号: 0529δ130 ( 2011) 12-∞20-04 Development and application of Real-time PCR for the detection of Toxoplasma gondii 2 2 2 UN Zhi-bingl.2 , ZHANG Hou-shuang , CAO Jie , ZHOU Yong-zhi , 2 2 ZHANG Yan-lei ，口 Guo-qing • , ZHOU Jin-lin • (1. College of Veterinary Medicine , South China Agricultural University , Guangzhou 51侃42 ， China; 2. Shanghai Veterinary Research Institute , Chinese Academy of Agricultural Sciences , Shanghai 200241 , China) Abstract:ηle specific primers and probes we陀 designed targeting the 529 bp fragment of Toxopla.sma gondii , and thus a TaqMan Real- time PCR was developed. 3ωclinical samples were detected using the Real-time PCR , and the detection data were compared with conven- tional PCR and loop-mediated isothermal amplification (LAMP) techniques. We found 血且t