红树植物红海榄中多糖的提取及其组成的研究.docVIP

　　红树植物红海榄中多糖的提取及其组成的研究 【摘要】 目的对红树植物红海榄中多糖的提取及其组成进行研究。方法红海榄叶经热水浸提、Sevage法脱蛋白等方法得到多糖；经完全酸水解，糖腈乙酸酯衍生化，并用红外光谱仪、气质联用仪对其结构和组成进行了研究。结果红海榄多糖由赤藓糖、D-阿拉伯糖和葡萄糖组成，它们的摩尔比为5∶1∶17。结论红海榄多糖为杂多糖。 【关键词】 红海榄； 多糖； 提取； 组分 　　多糖是存在于 自然 界的醛糖和(或)酮糖通过糖苷键连接在一起的聚合物，它是生物体内除蛋白质和核酸以外的又一类重要的信息分子，是维持生命活动正常运转基本物质之一。近年来,国际上对药用红树植物的化学成分及其药理研究表明，红树植物具有抗艾滋病、抗肿瘤、抗氧化等活性［1］。尽管红树植物在世界上分布广泛,含有大量活性先导化合物可 治疗 人类重大疾病,但这一类植物资源在某些方面并未真正得到研究、开发和利用,尤其是其药用价值未得到应有的重视。本实验对红树植物红海榄中的多糖进行提取并对其组成进行了研究。 　　1 材料与仪器 　　1.1 原料红海榄叶（采自湛江东海岛），洗净剪碎，置于通风处阴干，备用。 　　1.2 试剂95％乙醇；无水乙醇；氯仿；正丁醇；丙酮；无水乙醚；硫酸；碳酸钡；吡啶；盐酸羟胺；乙酸酐，以上试剂均为分析纯。 　　1.3 仪器E-5299旋转蒸发仪（巩义市予华仪器有限责任公司）；SHB-B95A型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；GCMS-QP2010气相色谱质谱连用仪（岛津制作所）；HH-S2系列恒温水浴锅（江苏省全坛市环宇 科学 仪器厂）；FTIR-8400S型红外光谱仪（日本岛津公司）；ESJ120-4型 电子 天平（沈阳市龙腾电子有限公司）；202-2型干燥箱（上海市实验仪器总厂）；GSP-84-02型磁力恒温搅拌器（山东电讯七厂）。 　　2 方法 　　2.1 多糖提取称取粉碎、干燥好的红海榄叶150 g，加入1 500 ml蒸馏水，超声处理20 min后加热到90 ℃，热水浸提3次，过滤，合并，得棕色滤液。用旋转蒸发仪在浓缩滤液至50 ml，抽滤去沉淀，加入3倍体积的95％乙醇沉淀多糖，于冰箱放置过夜，得棕色絮状物，离心收集沉淀。 　　2.2 Sevag法去蛋白［2］Sevag试剂的配制：用氯仿与正丁醇以4∶1混合。 　　上述沉淀加水溶解，即得棕色溶液，加入溶液1/3倍体积的Sevag试剂，剧烈振荡至无白色絮状物析出，然后离心，除去水相与有机相交界处的变性蛋白，剩余液体再加入200 ml无水乙醇，充分振荡摇匀，于冰箱静置24 h，得棕色絮状物。离心收集沉淀，沉淀经无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤两次脱去脂肪和色素，干燥，得棕色粗多糖1.5 g。 　 　　2.3 红外光谱法（IR）鉴定多糖采用KBr压片制样,在4 000～400 cm-1区间内用红外光谱仪扫描IR吸收。 　　2.4 多糖水解［3］称取30 mg粗多糖，加入5 ml 30 mmol/L的硫酸溶液，封管，超声片刻，至多糖完全溶解，100 ℃恒温水浴振荡2 h。将试管置于烘箱中于110 ℃反应6 h后冷却至室温，加BaCO3粉末中和、离心、干燥得到水解后的淡黄色单糖混合物0.0136 g。 　　2.5 糖腈乙酸酯衍生物的制备称取10 mg单糖样品和10 mg盐酸羟胺，用20 ml吡啶溶解，封管，95 ℃恒温水浴振荡40 min后冷却至室温，加入0.6 ml乙酸酐，封管，95 ℃恒温水浴振荡40 min，冷却至室温，得茶色单糖腈乙酸酯衍生物，待测。 　　2.6 单糖衍生物的GC/MS分析 　　2.6.1 色谱条件RTX-5石英毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，柱温：80 ℃，汽化室温度：280 ℃，载气为高纯度氦气，进样量1 μl，升温程序：起始温度80 ℃，保留时间2 min，每分钟5 ℃升温到260 ℃，保留1 min。 　　2.6.2 质谱条件离子源为Ei源，灯丝电流0.6 mA，离子源温度200 ℃，电离能量70 eV，接口温度250℃， 电子 倍增管电压1.20 kV，扫描周期0.5 s，扫描范围30.00～400.00 m/z，溶剂延迟3 min。 　　 3 结果 　　3.1 多糖红外光谱分析结果红海榄多糖的红外光谱如图1所示，从图谱中可以看出红海榄多糖具有以下结构特征：在 3 600～3 200 cm-1的一个强峰是O-H的伸缩振动。在3 000～2 800 cm-1的一组吸收峰是糖类C-H的伸缩振动引起的，1 400～1 200 cm-1的不太尖的吸收峰是C-H的变角振动，这两组吸收峰是糖类的特征吸收峰。1 665～1 625 cm-1间吸收峰是糖的水化物的吸收峰。1 200～1 000