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籼稻姊妹染色单体粘着蛋白OsRad21-i基因
第 48卷 第 1期 中山大学学报 (自然科学版 ) Vo l48 No1
2009年 1月 ACTA SC IEN T IARUM NA TURAL IUM UN IV ER SITA TIS SUN YA TSEN I J an 2009
籼稻姊妹染色单体粘着蛋白 Os R ad2 1 - i基因
的原核表达载体构建与表达
1, 2 3 3 1
康海岐 , 申国安 , 杨金水 , 程在全
( 1. 中国科学院昆明植物研究所 , 云南 昆明 650204;
2. 四川省农业科学院作物研究所 , 四川 成都 6 10066;
3. 复旦大学遗传研究所 , 上海 200433)
摘 要 : 以杂交水稻汕优 63 的根组织 cDNA 为模板 , 采用引物设计引入酶切位点和 R T - PCR 方法 , 扩增出了
籼稻姊妹染色单体粘着基因 OsR ad2 1 - i (A Y3 18757) 开放阅读框 (ORF) , 命名为 Eqfr, 两端分别带有 B am H Ⅰ
和 S a l Ⅰ限制性位点 。然后克隆到 p GEM - T载体 , 将重组克隆载体 p GEM - T - Eqfr与表达载体 pQE30 分别同时
α α
进行 B am H Ⅰ和 S a l Ⅰ双酶切 , 连接酶切后的 Eqfr和 pQE30 , 并转化 DH5 感受态细胞 , 获得了 DH5 [pQE30 -
Eqfr ] 重组克隆 。再以其重组质粒转化 M 15 [pREP - 4 ] 感受态细胞 , 筛选出 M 15 [pQE30 - Eqfr, pREP - 4 ] 重
组克隆 。通过诱导表达 , 检测到了相对分子质量约为 116 000 的重组蛋白表达 , 在诱导后的 1～3 h 里表达量较
高 , 之后表达量开始下降。用实验证实了理论推测 ORF 的正确性 , 所获得的表达蛋白及其表达体系为下一步的
蛋白质实验奠定了基础 。
关键词 : 杂交籼稻 ; 姊妹染色单体粘着蛋白; OsR ad2 1 - i; 原核表达 ; 载体构建
中图分类号 : Q78 文献标识码 : A 文章编号 : 0529 - 6579 (2009) 0 1 - 0062 - 05
Vector Con struction and Prokaryotic Expressing of O sR a d2 1 - i,
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