磺胺二甲嘧啶药物残留ELISA检测试剂盒的研制及初步应用.pdfVIP

f器辈革 i盟主骂辈革署署. Fe台d Processing ar飞d Testi吨 2号13fE 第4号卷莲9 期 磺胶二甲略览药物残留ELISA检测 试剂盒的研制及初步应用 李君华1 ，米振杰2 ，李志平2 ，全世清2 ，陈宝明2 ，吴 萌 l二 (1.河北省科学院生物研究所，河北石家庄 050081 2. 河北省兽药监察F斤，河北石家庄 050051 ) 摘 要:本试验旨在采用重氮化法合成的免疫抗原通过免疫BALB/c 小鼠进行融合获得高特异、高灵敏度的单 元隆抗体。在建立磺接二甲唆交单元il-抗体(5M2 mAb) 杂交痞细胞林和阻断EL15A 约基础上，初步研制出一种 一步法检测l 磺接二甲喀咬(SM2) 的 ELISA 快速检测试剂金(SM2-Kit) 。结果表明:SM2-Kit检测范围为0.5- 40.5μg/L ，检测时间为30 min ， IC到为1.4μg/L ，最低检测F!l 达0.1μg/L。经大量现场试验，猪肉组织最低检测限 为 lμg/kg ，猪饲料最低检测 FJl为 1μg/峙，猪尿最低检测 fJl为1.8μg/L ， 牛奶最低检测FJl为1.5 μg/L ，测试的回收 率平均在70%-110%。 关键词: SM2;E口SA; 优化;样品处理;回收率 中图分类号;S816.730.17 文献标识码 :B 文章编号 :0258-7033(2013)09-0078-04 磺股二甲唔睫(sulfamethazine , SM2 )作为抗菌剂 嗜睫药物残留。 广泛地应用于兽医临床以预防或治疗细菌性传染 1 材料与方法 病，亚治疗浓度作为饲料添加剂使用，可以提高畜禽 的抗病能力和畜牧业的经济效益。然而过量使用会 1.1 试剂与仪器磺胶二甲嘈院(5M2) ，纯度;;;:99% ， 导致其在食用动物产品中的残留，这些残留物对人 5igma; 检测抗原(5M2-0VA) 、抗5M2单克隆抗体均 4 类健康造成很大的威胁如能诱发人的甲状朦癌等。 为本室自制f J HRP辣棋酶标记的山羊拉小鼠IgG 为 j 国际食品法典委员会(CAC) 和欧美等大多数国家规 中杉金桥产品;吐温-20 (Tween-20) 为solarbio产品; 定食品和饲料中的5A5总量及磺胶二甲基喀院等单 四甲基联苯胶 (TMD) 购自宇德立生物科技有限公 个SA5的含量不得超过0.1 mg/l鸣。 2002年12 月我国 司 ;30% HzOz购自上海桃浦化工厂;其他有关试剂均 农业部公告第235 号文件规定在所有食品动物的肌 为国产分析纯试剂。 肉、脂肪、肝和肾中横股类最高残留限量100μg/屿， 酶联免疫检测仪 (Tecan公司) ;洗板机(币ler­ 并将磺肢二甲喀距列为兽药残留监控的重点[飞 mo) ;微量振荡器(海门市其林贝尔仪器制造有限公 目前，检测5M2 的方法有微生物法、物理化学 司) ;氮气吹干仪(杭州汇尔仪器设备有限公司) ;涡 法、如高压液相色谱(HPLC) 、气一液色谱(GLC) 、质 旋