麋鹿角醇提液对衰老小鼠细胞因子的影响.docVIP

　　麋鹿角醇提液对衰老小鼠细胞因子的影响 【摘要】 目的观察麋鹿角醇提液对D-半乳糖(D-gal)诱导衰老模型小鼠细胞因子的影响。方法取ICR小鼠54只，雌雄兼用，随机分成4组：正常对照组(NG，n=12)，模型对照组(MG，n=14)，麋鹿角醇提液低剂量组(LG，2 g·kg-1·d-1，n=14)，麋鹿角醇提液高剂量组(HG，4 g·kg-1·d-1，n=14)。正常对照组给予背部皮下注射生理盐水，其余各组用D-半乳糖(D-gal)按120 mg·kg-1·d-1背部皮下注射6周，造成亚急性衰老模型。造模同时，麋鹿角醇提液低剂量组和高剂量组分别给予相应浓度的麋鹿角醇提液，正常对照组和模型对照组给予相同容积的0.5% 羧甲基纤维素钠(CMC)。采用ELISA法检测血清中细胞因子IL-2，IFN-γ的浓度，RT-PCR法检测脾淋巴细胞IL-2，IFN-γ mRNA的表达。结果模型组小鼠血清中IFN-γ浓度降低，IFN-γ基因表达水平下降。而麋鹿角醇提液能升高模型组小鼠血清中IL-2和IFN-γ的浓度，并增强模型小鼠脾淋巴细胞IL-2，IFN-γ mRNA的表达。结论麋鹿角醇提液能促进D-gal诱导的衰老模型小鼠细胞因子IL-2，IFN-γ的分泌与表达，增强其细胞免疫功能。 【关键词】 麋鹿角; 衰老模型; D-半乳糖; 细胞因子; 白介素2; γ干扰素 麋鹿角为鹿科动物麋鹿Elaphurus davidianus Milne-Edl，即为麋鹿角乙醇提取浓缩液，浓度为2.5 g/ml。用0.5%羧甲基纤维素钠(CMC)溶液配制成所需浓度的麋鹿角醇提液备用。D-半乳糖为美国Amerisco公司产品，IL-2与IFN-γ的ELISA试剂盒为eBioscience公司产品。TRIZOL Reagent，加拿大BBI公司产品。DNA酶(DNase I)，-MLV逆转录酶，dATP,dTTP,dCTP,dGTP为Promega公司产品。Taq DNA polymerase为BBI公司产品，DL-2000 DNA Marker，TaKaRa公司产品。 　　1.3 仪器PTC-100 PCR仪，美国MJ.RESEARCH.INC产品;小源凝胶图像分析系统，上海小源科技有限公司产品;核酸蛋白分析仪，Eppendorf基因有限公司产品。 　 　2 方法 　　2.1 分组与给药54只ICR小鼠，雌雄兼用，体质量(18±2)g，随机分成4组：正常对照组(NG，n=12)，模型对照组(MG，n=14)，麋鹿角醇提液低剂量组(LG，2 g/kg，n=14)，麋鹿角醇提液高剂量组(HG，4 g/kg，n=14)。正常对照组按0.1 ml/10g给予背部皮下注射生理盐水，其余各组用D-gal按120 mg/kg背部皮下注射6周，1次/d，造成亚急性衰老模型。造模同时，麋鹿角醇提液低剂量组灌胃生药剂量2 g/kg麋鹿角醇提液(0.2 g/ml麋鹿角醇提液，给药容积0.1 ml/10g)，高剂量组给予灌胃生药剂量4 g/kg麋鹿角醇提液(0.4 g/ml麋鹿角醇提液，给药容积0.1 ml/10g)，正常对照组和模型对照组给予相同容积的0.5% 羧甲基纤维素钠。 　　2.2 ELISA法检测血清中细胞因子IL-2，IFN-γ的浓度取待测血清，按eBioscience公司提供的ElISA试剂盒中的方法测定血清中细胞因子IL-2，IFN-γ的浓度。 　　2.3 RT-PCR检测脾淋巴细胞IL-2，IFN-γ mRNA的表达用Trizol常规提取各组脾淋巴细胞的总RNA，用无RNA酶的DNase I处理后，按照Promega公司提供的逆转录酶使用说明书合成cDNA第一链。然后PCR法分别扩增IL-2，IFN-γ基因，β-actin作为内参基因。其引物序列如下：IL-2 上游引物5-aacctgaaactccccaggat-3，下游引物5-tccaccacagttgctgactc-3 预期扩增长度254bp;IFN-γ上游引物5-actggcaaaaggatggtgac-3，下游引物5-tgagctcattgaatgcttgg-3，预期扩增长度为237bp;β-actin(β肌动蛋白)上游引物 5- gagagggaaatcgtgcgtga -3 ，下游引物5- agtacttgcgctcaggagga -3 预期扩增长为400bp。PCR总反应体系为25μl：10×PCR Buffer 2.5μl，cDNA模板1μl，引物(上下游混合，各10μmol/L)1μl, dNTP mix(10mmol/L)0.5 μl，MgCl2 (25mmol/L) 2.0 μl，Taq酶(5U/μl)0.2 μl，ddH2O 17.8 μl 混匀后稍离心，执行PCR程序。