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青钱柳提取物清除羟自由基和抑制脂质过氧化的作用 　　[摘要] 目的 研究五种青钱柳提取物(CPS)清除羟自由基和抑制脂质过氧化作用。方法 采用组织匀浆MDA比色法测定不同浓度的CPS对小鼠肝脏自发性脂质过氧化的作用。利用Fenton 反应产生#8226;OH,研究CPS对羟自由基的清除作用,计算半清除率(IC50)。结果 五种提取物均明显的具有抗脂质过氧化作用,在浓度为1.0 mg#8226;ml????-1??时,对小鼠肝组织自发性MDA的抑制率大小为:正丁醇石油醚多糖水乙酸乙酯。CPS对#8226;OH自由基IC50大小为:水石油醚正丁醇多糖乙酸乙酯。结论 五种青钱柳提取物均有较强的体外抗氧化活性,且活性与浓度呈明显的量效关系。?? 　　[关键词] 青钱柳;提取物;脂质过氧化;自由基?? 　　文章编号:1003-1383(2009)04-0381-03 　　中图分类号:R 963 　　 文献标识码:A 　　 　　青钱柳[Cyclocarya paliurus(Batal) Iljinskaya](CPS)又名青钱李(江西),系双子叶植物纲(Dicotyledoneae)胡桃科(Juglandaceae)青钱柳属植物,它是我国独有珍稀树种资源????[1]??,分布于广西、江西、浙江等地的山区、溪谷或石灰岩山地,为广西特色植物。据《中国中药志要》记载,其树皮、树叶具有清热解毒,止痛功能,可用于治疗顽癣。长期以来民间用其叶片做茶,因其味甜有清热解暑、降糖、降压的功效,又称为甜茶,神茶等??[2]??。青钱柳干叶的主要成分有糖、氨基酸、有机酸、黄酮、酸性物质、内酯、香豆精、三萜及皂甙、甾醇等[2]??。我国从1970年开始对青钱柳进行药用开发研究,发现青钱柳具有明显的降血糖、降血压、减肥、抗肿瘤、抗衰老、抗过敏、清热解暑、提高人体免疫力、促进新陈代谢等多种功效,尤其对治疗糖尿病有显著疗效????[3]??。本实验对青钱柳不同提取物的体外抗氧化性进行了研究,为更进一步开发青钱柳保健产品提供理论依据。 　　 　　材料与方法 　　 　　1.动物 昆明种小鼠,雌雄各半,体重(20±2)g,由桂林医学院实验动物中心提供。?? 　　2.实验材料与仪器 青钱柳采自广西阳朔县白沙镇青钱柳基地,752??GW型紫外分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)、FA2004电子天平(上海精科天平)、小型三用水箱(北京医疗设备厂)、XH??B型旋涡混合器(江苏康健医疗用品有限公司)、LD??0.8离心机(北京医用离心机厂)、旋转蒸发器(RE??52型,上海亚荣仪器厂生产)。?? 　　3.试剂 丙二醛(MDA)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)、考马斯亮兰蛋白测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、无水乙醇、蒸馏水、邻二氮菲、硫酸亚铁、过氧化氢均为分析纯,PBS液为自制。 　　?? 　　4.实验方法?? 　　(1)青钱柳不同溶剂提取物的制备 取烘干过筛的青钱柳粉末,分别按固液比1∶20加入去离子水,用旋转蒸发器提取2 h,过滤,去残渣。滤液分两部分,一部分加入80%乙醇提取后再用水提取,利用水提醇沉淀法????[4]??用三氯醋酸去蛋白质后得到青钱柳多糖合物,另一部分加入80%乙醇,提取1.5 h,分别用正丁醇、乙酸乙酯、石油醚萃取,得正丁醇提取物、乙酸乙酯提取物、石油醚提取物,最后剩余的为水提物。各提取物均用真空浓缩至膏状,并于40℃真空干燥,冷藏备用。?? 　　(2)CPS对小鼠肝脏自发性脂质过氧化的影响 小鼠禁食12 h后摘除眼球放血处死,取肝,在0~4℃下用生理盐水制成5%肝匀浆。实验分为对照组(10%肝匀浆)、阳性组(VitC)和高、中、低3个剂量的青钱柳提取物组(10%肝匀浆和青钱柳不同溶剂提取物配液)。以硫代巴比妥酸法测定MDA含量,并计算抑制率: 　　抑制率(IR)=(对照组MDA-提取物组MDA)/对照组MDA。?? 　　(3)CPS对羟自由基的清除作用 　　采用亚铁离子催化过氧化氢产生(#8226;OH)的方法。在样品管中加0.75 mmol/L的邻二氮菲溶液1 ml,PBS 2 ml和1 ml样品,旋涡混合器混匀后,加0.75 mmol/L的硫酸亚铁溶液1 ml,旋涡混合器混匀后,加0.01%过氧化氢溶液1 ml,置恒温水浴中37℃保温1 h。反应液置比色皿中,于分光光度计中在536 nm测定吸光度As。用1 ml蒸馏水代替1 ml样品,测定吸光度为Ap。吸光度为Ab的管不加过氧化氢和样品,都以蒸馏水代替。按以下公式计算羟自由基的清除率(d%):d%=(As-Ap)/(Ab-Ap)×100。?? 　　5.统计学处理 计量资料以均数±标准差(-?±??s??)表示,采用E