超氧化物歧化模拟酶的研究进展及应用前景.docxVIP

模拟超氧化物歧化酶的研究进展及应用前景摘要：超氧化物歧化酶能有效清除体内的活性氧，从而避免机体损伤，但其分子量大、稳定性差，应用受局限，因此其化学模拟引起了人们的研究兴趣。本文简述了活性氧的危害、超氧化物歧化酶的作用机理以及超氧化物歧化模拟酶（特别是CuZnSOD模拟酶、MnSOD模拟酶）的研究进展。关键词：超氧化物歧化酶模拟酶金属模拟酶1活性氧及其危害需氧生物的生存离不开氧，但是氧的某些代谢产物及其衍生的活性物质可能会损伤机体，这些物质被称为活性氧物种(reactive oxygen species，ROS)，是指由氧形成的，主要包括:O2-、OH-、H2O2等[1]。适量的ROS在分子间和细胞内信号传递、细胞生长与分化及宿主免疫防御机制等方面有重要作用[2]。但是，过量的ROS对机体是有害的，机体内过多的活性氧会引起脂质过氧化，改变生物膜结构和功能，使蛋白质变性、交联，酶失活等，同时也与心肌休克、辐射损伤、动脉粥样硬化、免疫系统缺陷等疾病的发生、发展密切相关[1]。2超氧化物歧化酶及催化机理超氧负离子自由基（O2-）是活性氧物种之一，可对脂质、蛋白质、核酸等进行广泛进攻而产生极大的毒害作用。而超氧化物歧化酶（SOD）是生物体内天然的O2-的“克星“，是目前唯一一种能有效清除超氧自由基的酶[1]。超氧化物歧化酶是一种广泛存在于动、植物及微生物中的金属酶，按所含金属辅基的不同，至少可分为三类[3]：1、Cu-ZnSOD，呈蓝绿色，主要存在于真核细胞的细胞浆内，分子量在32000左右，由两个亚基组成，每个亚基含一个铜和一个锌。2、MnSOD，呈粉红色，其分子量随来源不同而异；来自原核细胞的分子量约为40000，由两个亚基组成，每个亚基各含一个锰，来自真核细胞线粒体的MnSOD，由4个亚基组成，分子量约为800000。3、FeSOD，呈黄色，只存在于真核细胞中，分子量在38000左右，由两个亚基组成，每个亚基各含一个铁。此外还有Co-ZnSOD和NiSOD，分别存在于牛肝和土壤链霉菌和藻青菌中。SOD都能催化超氧化物阴离子自由基歧化为过氧化氢与氧气。此反应过程为两步：第一步，作为有害物质的超氧阴离子在SOD的作用下和氢离子反应，生成另一种物质——过氧化氢；第二步，过氧化氢又在过氧化氢酶的作用下反应，最终生成了对生命体无害的物质——水[3]，如下图:尽管不同来源的 SOD 催化机理各不相同，各种 SOD 在催化反应中有共性，其共同点是在催化中都出现活性中心金属的交替还原和再氧化，用通式表示如下：其中 M（n）代表 Cu（Ⅱ）、Fe（Ⅲ）或者是Mn（Ⅲ），M（n－1）则代表 Cu（Ⅰ）、Fe（Ⅱ）或者是Mn（Ⅱ）。现已证明，Zn（Ⅱ）有两个作用，一是调节咪唑基与 Cu 的相互作用，二是对活性中心的结构起稳定作用。研究表明，在催化过程中，随着吸收一个质子，咪唑环与 Cu 相连的一侧的 N 原子迅速地发生质子化和去质子化，两个金属离子之间的咪唑桥随之断开和再接，如图 1－3 所示。当 Cu（Ⅱ）被还原为 Cu（Ⅰ）时，Zn（Ⅱ）的结合位点只受到微小的扰动，Zn—N 键仍保持着完整性，这有利于咪唑桥的重接。[4]3 模拟超氧化物歧化酶的研究进展自从1973年weisiger等在鸡肝中发现两种SOD以来，至今已采用了各种分离及分析方法，成功地从各种动物肝脏及体液中分离纯化了多种SOD。临床上SOD主要用于延缓人体衰老，防上色素沉着，消除局部炎症，特别是治疗风湿性关节炎、慢性多发性关节炎及放射治疗后的炎症，因其无抗原性，毒副作用较小，成为了很有临床价值的治疗酶。除了在临床上大显身手，近年来SOD又被广泛地应用于日用化工行业。但SOD有难以透过细胞膜、半衰期短（仅5-8 min）、稳定性不高等缺点，而使其应用受到了限制[5]。为此采用化学合成手段合成具有结构和功能类似于SOD的配合物来模拟SOD，将为进一步认识SOD的结构与功能的相关规律和开发研制新型SOD制剂提供重要的理论依据。对金属超氧化物歧化模拟酶的研究，主要集中在三个方面：Cu-ZnSOD的模拟研究、MnSOD的模拟研究及FeSOD的模拟研究。3.1 Cu-ZnSOD的模拟研究X-射线单晶结构分析表明，Cu-ZnSOD的活性部位包含一个咪唑桥联的Cu(Ⅱ)、Zn(Ⅱ)结构。Cu(Ⅱ)与1个水分子和4个来自组氨酸残基(His-44，-46，-61和-118)的咪唑氮配位，呈现三角双锥畸变的四方锥构型，其中1个咪唑基(His-61)的氮原子与Zn(Ⅱ)桥联，另外，2个咪唑的氮原子(His-69，-78)和1个天冬氨酸残基的羧氧(ASP-81)配位，呈畸变四面体构型。Cu(Ⅱ)是氧化还原的活性中心，Zn(Ⅱ)只起着稳定蛋白质构像的作用。[6]对CuZnSOD模拟物的研究早期集中在对咪唑桥联铜锌