猪圆环病毒2型ORF2基因片段的原核表达及间接ELISA诊断方法的初步建立.pdfVIP

2008 年 9 月 第 27 卷第3 期 广西农业生物科学 Vo 1. 2T. No.3 Journal of Gùangxi Ag nc. ana Bio I..ScieÍlce Sept. • 2008 文章编号: 1008 - 3464 (2008) 03 - 0201 - 05 猪圈环病毒2 型 ORF2 基因片段的原核表达 及间接 ELISA 诊断方法的初步建立 屈素沽，何苹萍，秦毅斌，朱芸，陈琼，黄伟坚 (广西大学动物科学技术学院，广西南宁 530005) 摘要g 根据猪圆环病毒 2 型 (PCV2) LC 株序列，设计合成 3 对引物，通过 PCR 扩增 PCV2 的 3 个不 同 ORF2基因片段，分别将其克隆到 pET-32a 载体中，将重组表达质粒转化大肠杆菌 BL21. 表达并纯化了 重组蛋白. Western-blot 分析表明，重组蛋白可以与 PCV2 阳性血清反应，表明该蛋白具有良好的抗原性. 以纯化的重组蛋白初步建立了间接酶联免疫吸附实验 (ELISA) 方法，经方阵漓定确定最佳包被浓度为 0.24μg/mL.血清最佳的稀释度为 l 40. 关键词g 猪圈环病毒 2 型 (PCV2) ， ORF2 片段$原核表达$间接 ELISA 方法 中图分类号: 5854.43 文献标识码:A Expression of fragment of porcine circovirus type 2 ORF2 in Escherichia coli and development of indirect ELISA with recombinant protein QU Su-jie , HE Ping-ping , QIN Yi-bin , ZHU Yun , CHEN Qiong , HUANG Wei-jian (College of Animal Science and Technology , Guangxi University , Nanning 530005 , China) Abstract: According to the porcine circovirus type 2 (PCV2) LC strain , 3 pair of primers were designed and synthesized to amplify the ORF2b , ORF2c and ORF2d gene. The amplified products were cloned into expression vector pET-32a and expression in Escherichia coli BL2 1. The Western- blot analysis showed that the recombinant protein had a good antigenicity with positive PCV2 serum. An indirected enzymelinked immunosorbentassy (ELISA) was established with the purified recombinant protein , after the square matrix titrate determination best density was 0.24μg/mL， the blood serum best dilution ratio was 1 I 40. Key words: porcine circovirus type 2 (PCV2); ORF2; prokaryotic expression; indirected ELISA 猪圆环病毒 (porcine circovirus , PCV) 是迄今发现的一种最小的动物病毒。 PCV 具有 PCVl 和 PCVZ 两种基因型. PCVl 元致病性，广泛存在于猪体内及猪源传代细胞系。研