猪增生性肠炎套式PCR检测方法的建立及初步应用.pdfVIP

• 102 • 生物技术 中国畜牧兽医 2014 年第 41 卷第 4 期 猪增生性肠炎套式 PCR 检测方法的 建立及初步应用 张文波l ，戴益民1 ，蒋新华2 ，胡杨1 ，徐昌满1 ，陈松昌2 ，邓舜洲I (1江西农业大学动物科学技术学院，江西南昌 330045 ;2. 南昌金牧动物保健服务有限公司，江西南昌 330013) 摘要:本试验旨在建立检测猪增生性肠炎(porcine proliferative enteropathy ,PPE) 的套式 PCR 方法，为临床快速鉴别诊断 和防控该病提供病原学依据。根据 GenBank 上已发表的的劳森氏胞内菌(Lawsonia intracellularis , Ll)的基因组序列(登录 号 :AM180252)设计 2 对特异性引物，以疑似 PPE 病猪粪便中纯化的 DNA 为模板，建立了套式 PCR 方法，并对 PCR 产物进 行序列测定，所扩增的序列与 GenBank 上登录的劳森氏胞内菌相应序列的同源性在 99% 以上。应用本试验建立的套式 PCR 方法对疑似 PPE 病猪的粪便进行检测，结果表明，本方法具有快速、方便和敏感度高等优点，可用于 PPE 的临床检测。 关键词:猪增生性肠炎;劳森氏胞内菌;套式 PCR 文章编号:1671-7236(2014)04-0102-05 文献标识码:A 中图分类号:S858.28 猪增生性肠炎(procine proliferative enteropa 上的困难等原因，该病并未引起国内兽医界的充分 thy , PPE) ，又称猪回肠炎，是由劳森氏胞内菌 重视。近年来，江西地区猪群的 PPE 疑似病例明显 (Lawsonia intracellularis , LI) 引起的以回肠和结 增加，有必要开展检测方法的建立及流行病学调查， 为病原学诊断及综合防制方面的研究打下基础，减 肠隐窝内未成熟的肠细胞发生腺瘤样增生为特征的 猪的接触性肠道传染病(Jeffrey Zimmerman 等， 少由于该病引起的经济损失。 1 材料与方法 2012; 郭建超等，2012;Kroll 等，2005) 。 1. 1 病料及主要试剂 病料为采自江西规模化猪 自 1931 年美国首次报道该病以来，至今 PPE 己呈世界性流行，其感染率高，宿主广泛(Biester 场疑似 PPE 猪的粪便。 Taq DNA 聚合酶、dNTPs、 DL2000 DNA Marker 均购自北京全式金生物技术 等， 1931; Pedersen 等， 2010) 。中国已经有学者对 有限公司 ;PCR 产物胶回收试剂盒购自天根生化科 该病的发病情况和诊断治疗进行了报道(李薇等， 技(北京)有限公司。 2009; 曲向阳等，2012) 。随着中国养猪业集约化程 1. 2 方法 度的不断提高，种猪的引进会更加频繁，该病对中国 1. 2.1 引物设计 根据 GenBank 上登录的劳森氏 养猪业的发展将会构成巨大威胁。 胞内菌基因组序列(登录号:AM180252) ，设计 2 对 劳森氏胞内菌是一种专性胞内寄生菌，主要寄