荧光定量RT-PCR检测PRRSV方法的建立及初步应用.pdfVIP

.34. Animal Husbandry Veterinary Medicine 2016 Vol. 48 No. 1 周一媚，劳秀杰，黄巧莲，等.荧光定量 RT-PCR 检测 PRRSV 方法的建立及初步应用 [J]. 畜牧与兽医， 2016 , 48 (1): 34-39 Zhou Y M, Lao X J , Huang QL, et al. Establishment and application of Real-time RT-PCR methods for detection of porcine reproductive 皿d respirato巧 syndrome virus [J]. Animal Husbandrγ Veterinary Medicine , 2016 , 48 (1): 34-39 荧光定量RT-PCR 检测PRRSV 方法的建立及初步应用 周一媚I\ 劳秀杰1\ 黄巧莲1 ，徐露凝1 ，郑悦l ， 叶笑l ，王晓杜l ， 2 ，邵春艳l 气杨永春1 ， 2*\ 宋厚辉1 ， 2 * * (1.浙江农林大学动物科技学院，浙江临安 3113∞; 2. 浙江农林大学动物健康检测中心，浙江临安 3113∞) 摘要:以猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV) ORF5 保守区域为靶基因，基于SYBR Green 构建了以 RNA 为模板、反转录和 PCR 扩增一步完成的 0 2 荧光定量 RT-PCR (qRT-PCR) 方法。该方法对质粒和细胞培养物中病毒的检测限分别为 1 x 10 copies/μL 和 1 x lO- TCID /mL; 组内和组间差 50 异系数 (CV) 均小于5% 。利用本方法检测 126 份临床组织样品， PRRSV 阳性率为42.06% ，与传统RT-PCR 检测结果具有较好的一致性(Kappa = 0.918) ，且敏感性显著高于传统 RT-PCR。本研究建立的 qRT-PCR 方法为猪繁殖与呼吸综合征的临床诊断提供了技术手段。 关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV) ;荧光定量 RT-PCR (qRT-PCR); ORF5 中图分类号: S852.6 文献标志码:A 文章编号: 0529-5130(2016)01-∞34-06 Establishment and application of Real-time RT-PCR methods for detection of porcine reproductive and respiratory syndrome virus lo 1 1 1 1 1 ZHOU Yimei , LAO Xiujie , HUANG Qiaolian , XU Luning , Zheng Yue , Ye Xiao , 1 12 1 h 事 WANG Xiaodu I.2, SHAO Chunyan ,2 , YANG Yongch