《现代分子生物学》第八讲分子.pptVIP

第八讲 分子生物学研究方法 （二）DNA分析技术 本章主要内容： 1、核酸分子杂交技术； 2、SNP理论及应用； 3、基因芯片技术； 4、RNA分析技术。 DNA分析技术（续） 核酸分子杂交的基本原理 探针的标记 核酸探针是指能与特定核酸序列发生特异性互补的已知核酸片段。一般而言，核酸探针带有特殊的标记物。 标记物 标记物应具备的条件： （1）标记后的探针的分子结构要尽可能与原来的分子结构相同，绝不影响其碱基配对特异性，不影响探针分子的主要理化特性，尤其是杂交特性。 （2）标记探针的检测方法简便、省时、准确可靠、重复性好、灵敏度高。 （3）稳定性好、环境污染少、价廉。 常用的探针标记物： 1、 放射性同位素： 3H、32P、35S、125I等。 2、非放射性同位素： 地高辛素、辣根过氧化酶、碱性磷酸酶等。 探针的标记的方法 1) 切口平移：利用DNA聚合酶I的特点 2）随机引物延伸法 人工合成的6个核苷酸残基的寡核苷酸片段，4096种排列顺序， klenow大片段作为聚合酶。 3）末端标记法 核酸分子杂交及检测 2、复性 在适当条件下，变性DNA的两条互补单链重新结合，形成双链的过程称为复性。 在热变性后，当温度缓慢冷却至比Tm值低20-30℃时，变性的单链DNA即可恢复双链螺