PikoReal使用培训-致病菌检测.pptVIP

无Cq值：阴性；Cq 值在 35以内：阳性 Cq值在35－40之间：再做一次，结果相同，判为阴性 内部对照：Cq 在33以内，如无Cq, 试剂可能有问题 阳性 阴性 阳性 阴性 试剂有问题 实验注意事项： 1、样品处理、试剂准备、上样、检测在不同区域操作，严防污染 2、加样细心，防止错漏 3、PCR板放入样品槽时，位置对准，防止移位。 * * * * * * * * * * * * 重点：光源，监测器，热循环仪，光路系统的设计 * * * * * * * * * * * * * 研发生产中心：位于芬兰Espoo 光源: 5x LED 寿命长，终身无需更换，为qPCR实验提供持续，稳定的激发信号 无需使用ROX染料进行光强校正 探测器：CCD 相机 能同时快速收集整板多重荧光信号数据 高灵敏度 PCR模块：96孔半导体PCR PikoREAL 的硬件系统: 功能： 绝对定量 双探针法 HRM法 相对定量 基因型分析 熔解曲线分析 选配模块 五通道四色： 激发波长 (nm) 发射波长 (nm) 预校正的染料 475–500 520–550 FAM, SYBR Green 515–535 557–590 HEX, Yakima Yellow 570–590 615–650 ROX, Texas Red 600–640 666–740 Cy 5 475–500 520–590 单色通道，HRM通道 一个反应管里最多可同时检测4种不同的致病菌核酸 仪器特点： 1、硬件组合优越，设计创新 2、更加适合5-10ul小反应体系，成倍节省实验成本 3、小巧、快速、稳定、安静无声 致病菌检测实验操作及结果分析 检测流程 25g 或25ml 样品 ＋ 225ml预增菌培养液，混匀 ，适宜的温度下培养24小时 取1ml培养液，加入裂解液，裂解细菌，释放核酸（45min） 配制标准品，PCR反应液，加样（30min） 定量PCR反应，查看并分析结果（1.5h） 阴性：出结果报告 阳性：继续用培养法验证结果 两天内可出结果 检测项目 GB中的名称 OXOID的英文名称 OXOID的中文名称 OXOID货号 规格 沙门氏菌 缓冲蛋白胨水（BPW） Buffer Peptone Water(ISO) 缓冲蛋白胨水(ISO) CM1049B 500g CM1049R 2.5kg CM1049T 5kg 金葡菌 10%氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤 Tryptone Soya Broth（SoybeanCasein Digest M edium USP） 胰蛋白胨大豆肉汤（美国药典中大豆酪蛋白消化物培养基） CM0129B 500g CM0129R 2.5kg CM0129T 5kg 大肠埃希氏菌O157：H7/NM 改良EC肉汤 EC BROTH (Reduced Bile Salts) EC肉汤（减少胆盐） CM0990B 500g 志贺氏菌 GN增菌液 GN Broth GN增菌液 R453511 100 g R453512 500 g R453514 2.5 kg OXOID 常用预增菌培养液： 赛默飞咨询热线：800－810－5118 1、预增菌 － 按说明书操作 2、细菌裂解，配制反应液及上样 1）细菌裂解：获得待测样品。 2）配制标准品：阴性对照样品，阳性对照样品（4个浓度） 3）按检测样品量计算所需反应液的量 4）配制所需反应液，混合均匀 5）把反应液加入反应板，并分别在相应的孔加入阴性对照样品、阳性对照样品，待测样品。 以下操作均按照检测试剂盒操作说明书进行： 检测试剂开放，可选择各国产及进口厂家试剂盒 以金黄色葡萄球菌的检测为例 1、样品预增菌 25g 或 25ml 样品 ＋ 10%氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤 37度，24小时 金黄色葡萄球菌：Staphylococcus Aureus (SA) 以金黄色葡萄球菌的检测为例 2、细菌裂解，样品制备 A、取1ml 培养液，13000rpm 离心2分钟 B、去上清液，加入100ul DNA提取液充分混匀 C、沸水浴加热10分钟（误差不超过1分钟） D、13000rmp 离心5分钟，上清液备用（样品） 试剂盒：Liferiver 金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒（荧光法） 生产商：上海之江生物科技 货号：DD－0041－02 3、梯度标准品配制 A、内部对照：取内部对照品4ul，加36ul水，震荡混匀后，3000rmp离心10秒，备用。 B、10倍稀释标准品（如只需出阴阳性结果，则无需配制系列浓度的阳性标准品） 1）取4只2ml离心管，分别标记为：2、3、4、5 （浓度依次为：5×106 、