生物基因工程的基本操作程序23课时.pptVIP

学习目标 1、简述基因工程的原理和技术。 2、明确获取目的基因的途径、基因表达载体的模式结构、将目的基因导入受体细胞的技术和目的基因的检测与鉴定的方法。 哪项不是基因表达载体的组成部分( ) A.启动子 B.终止密码 C.标记基因 D.目的基因 2、科学家已经能够通过基因工程的方法，能使番茄果肉细胞中含有人奶蛋白。以下有关该基因工程的叙述错误的是（ 　） A．采用反转录的方法得到的目的基因有启动子、终止子 B．用同种限制酶处理质粒和含目的基因的DNA，可产生相同的黏性末端而形成重组DNA分子 C．番茄的叶肉细胞可作为受体细胞 D．启动子对于目的基因在番茄的叶肉细胞中的表达是不可缺少的 检测目的基因是否翻译成蛋白质 　　具体做法是：　　第一步，将目的基因在大肠杆菌中表达出蛋白质；　　第二步，将表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出抗体（一抗）；　　第三步，从转基因生物中提取蛋白质，走凝胶电泳；　　第四步，将凝胶中的蛋白转移到硝酸纤维素膜上；　　第五步，将抗体（一抗）与硝酸纤维素膜上的蛋白杂交，这时抗体（一抗）与目的基因表达的蛋白（抗原）会特异结合。　　由于这种抗原—抗体的结合显示不出条带，所以加入一种称为二抗的抗体，它可以与一抗结合，二抗抗体上带有特殊的标记。如果目的基因表达出了蛋白质，则结果为阳性。 一 原核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶结合位点 RNA聚合酶是一种蛋白质，能识别并与调控序列中的结合位点结合，能催化DNA转录为RNA 启动子 终止子 启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录 一 原核细胞的基因结构 与RNA聚合酶结合位点 RNA聚合酶 A G G T C A C G T C G T C C A G T G C A G C A G G U C A C G U C G RNA聚合酶 启动子 终止子 二 真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 调控遗传信息的表达 (调控序列) 外显子 (能编码蛋白质) 内含子 (不能编码蛋白质) 启动子 终止子 都由能够编码蛋白质的______ 和具有调控作用的______ 区组成的 相同点 编码区是间隔的、_____的 编码区是 _____的 不同点 真核细胞 原核细胞 原核细胞与真核细胞的基因结构比较 连续 不连续 编码区 非编码 原核细胞不具有剪切、拼接mRNA的能力，所以真核细胞的基因不能在原核细胞的受体细胞中正确表达 成熟mRNA 反转录 反转录法合成目的基因 cDNA cDNA不含非编码区的启动子、终止子 不含编码区的内含子 质疑 从cDNA文库中获取的目的基因没有启动子，如果要实现将编码序列导入受体生物中并成功表达，基因表达载体还需哪些元件？ 基因表达载体的组成： 目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 聚焦三：基因表达载体的构建 a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 e、复制原点 基因的运载体、目的基因、启动子、终止子和 标记基因 等都是DNA片断，如何将它们连接起来？ 质粒 目的基因 限制酶 DNA连接酶 重组DNA 运载体 目的基因 限制酶切 同一种 黏性末端 黏性末端 DNA连接酶 重组DNA分子 有几种重组DNA ？ 基因表达载体的构建 质粒 DNA分子 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA 连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 限制酶 目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。 聚焦三：基因表达载体的构建 质粒中插入启动子、终止子和标记基因 等 DNA片断，也是同样的重组方法 1、哪项不是基因表达载体的组成部分( ) A.启动子 B.终止密码 C.标记基因 D.目的基因 将目的基因导入受体细胞 转化 目的基因进入受体细胞内，并且在 受体细胞内维持稳定和表达的过程。 阅读P12-13，思考： 将目的基因导入植物细胞、动物细胞、微生物细胞的方法分别有哪些？ 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 显微注射技术 感受态法 受体细胞 植物细胞 动物细胞 原核细胞 植物肿瘤 农杆菌转化法 适用于 双子叶植物 裸子植物 适用于 单子叶植物 基因枪法 胚珠 花药 花丝 柱