生物选修三12基因工程的基本操作程序.pptVIP

例2、下列关于限制酶的说法正确的是 A．限制酶广泛存在于各种生物中，但微生物中很少 B．一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C．不同的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端 D．限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键 例3、依右图有关基因工程的工具酶功能的叙述，不正确的是 A．切断a处的酶为限制核酸性内切酶 B．连接a处的酶为DNA连接酶 C．切断b处的酶为解旋酶 D．连接b处的酶为DNA连接酶 例4、质粒是基因工程中最常用的运载体，它的主要特点是 ①能自主复制 ②不能自主复制 ③结构很小 ④蛋白质 ⑤环状RNA ⑥环状DNA ⑦能“友好”地“借居” A．①③⑤⑦ B．①④⑥ C．①③⑥⑦ D．②③⑥⑦ 例5、（多选）下列有关质粒的叙述，错误的是 A．质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器 B．质粒是细菌细胞质中能自主复制的小型环状DNA分子 C．质粒只有在侵入宿主细胞后才能在宿主细胞内复制 D．细菌质粒的复制过程一定是在宿主细胞外独立进行的 阅读课本P8-P13，思考以下问题： 1.基因工程的基本程序是什么？ 2.什么是目的基因？试举出其中的三类。 3.获取目的基因的方法有哪几种？ 4.什么是基因文库？如何构建基因组文库？ 5.如何从基因文库中查找出目的基因？ 6.cDNA文库与基因给文库有什么不同？ 7.PCR技术的基本条件是什么？ 8.PCR技术的优点是什么？ 9.构建基因表达载体需要具备哪些元件？它们各自起什么作用？ 10.基因工程的受体细胞有哪些？ 11.将目的基因导入植物、动物和微生物细胞中常用的方法是什么？ 12.为何要进行目的基因的检测和鉴定？ 步骤一、目的基因的获取 方法2、利用PCR技术扩增目的基因 方法2、利用PCR技术扩增目的基因 步骤二：基因表达载体的构建 步骤三：将目的基因导入受体细胞内 DNA分子杂交原理：互补的DNA单链在一定条件下结合成双链，即能够进行杂交。这种结合是特异性的，及严格按照碱基互补配对原则进行的。因此，我们用探针和转基因生物的DNA杂交时，如果出现杂交带（用特殊显影装置可以看见），则说明目的基因已插入受体细胞的染色体DNA中。 基因探针：是一段单链的DNA或RNA，带有放射性同位素标记并能与目的基因的一条链发生碱基互补配对。 下列属于PCR技术的条件的是 ①单链的脱氧核苷酸序列引物 ②目的基因所在的DNA片段 ③脱氧核苷酸 ④核糖核苷酸 ⑤DNA连接酶 ⑥DNA聚合酶 ⑦DNA限制性内切酶 A.①②③⑤ B.①②③⑥ C.①②③⑤⑦ D.①②④⑤⑦ 练习2 B 方法3：通过DNA合成仪直接合成目的基因 DNA合成仪 推测 推测 合成 前提：基因比较小、核苷酸序列已知 蛋白质的氨基酸顺序 mRNA核苷酸序列 基因DNA的核苷酸序列 目的 基因 问题4 3、如果不知道目的基因的核苷酸序列，可采用_________________ 获取目的基因的三种方法应用 1、如果知道目的基因两端的核苷酸序列，而且基因比较大，可采用____________ 2、如果知道目的基因的序列，而且基因比较小，可采用________________ PCR技术扩增 化学方法人工合成 构建基因文库的方法 1 2 目的？ 组成？ 探究4 互动课堂 步骤二：基因表达载体的构建——基因工程的核心 1 目的： 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 2 组成： 目的基因+启动子+终止子 +标记基因等 表达载体的组成 启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，RNA聚合酶识别和结合的部位 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录 标记基因：鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来 基因表达载体的构建过程 质粒 DNA分子 限制酶处理 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 一个切口 两个黏性末端 用同种限制酶分别切割目的基因和质粒，使之露出相同的黏性末端，再加入DNA连接酶 下列关于基因表达载体构建的相关叙述，不正确的是(　　) A．需要限制酶和DNA连接酶 B．必须在细胞内进行 C．抗生素抗性基因可作为标记基因 D．启动子位于目的基因的首端 练习3 B 1 2 转化？ 方法？ 探究5 互动课堂 步骤三、将目的基因导入受体细胞 1 转化： 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞 内维持稳定和表达的过程。 2 常用的受体细胞： 大肠杆菌、枯草杆菌