第七章基因工程菌苗2013.pptVIP

第七章 基因工程菌苗P190; 细菌一旦获得耐药性，存在与细菌染色体、质粒和转座子中的耐药基因就可通过转化、转导、接合和转座等方式，将抗性基因传播到其他敏感菌，使之成为抗药菌株，给临床传染病的治疗带来困难。据WHO1996年报告，全球每年死亡约5190万人，其中1/3约1730万死于传染病。;新病原体不断出现与鉴定，新的疫苗研制也相继开始。 重要病原体全基因测序的开展和完成，及类似生物表型的不同菌属间的同源序列和异源序列的发现，对抗感染研究来说，像进行了一场革命，不仅会促进病原体致病和发病机制的研究，也会开阔和调整菌苗研究的策略和思路。 目前已完成500余种病毒的全基因测序。 ;;;第二节 目前应用的菌苗及其存在问题 ;1、减毒活菌疫苗 如卡介苗（BCG），是巴斯德研究院A. Calmette和Guerin,C等（1921）将一株牛型强毒结核菌在甘油-胆汁-马铃薯培养基上传230代后（13年），获得的对动物不致病，但产生抗结核免疫反应的菌苗即BCG。对免疫婴幼儿有保护效果。 后来发现对成人的保护效果波动范围很大，对其减毒机制始终不清。直至近年来完成结核分枝杆菌全基因测序后，与有毒牛型结核分枝杆菌全基因序列进行比较，方知BCG缺失了毒力相关基因。 总之，对胞内菌目前还是用减毒的活菌苗。 ;2.灭活死菌疫苗 通过加热处理或福尔马林、戊二醛、β-内酯等化学处理得到 如霍乱死菌苗，百日咳死菌苗等。死菌苗的主要优点是稳定，缺点是需要多次免疫才能得到好的保护效果。 灭活死菌苗须加佐剂以提高免疫效果。 ;3.亚单位或成分苗 ①从细菌培养液中提取、用化学方法脱毒的类毒素苗，如破伤风类毒素（TT）、白喉类毒素（DT），免疫后诱导机体产生的抗血清能特异中和TT破伤风类毒素或DT白喉类毒素，其保护效果可达95%以上。由于毒素纯化方法的改进，产品的副作用很小； ;②荚膜细菌纯化的多糖菌苗，可诱导产生的抗体能保护机体抵抗入侵荚膜菌的感染。如嗜血性流感杆菌b(Hib)、伤寒杆菌Vi多糖等多糖苗，能诱导机体产生T细胞非依赖的抗体反应，其特点是诱导产生短期的IgM抗体，缺乏免疫记忆，对不到18个月幼儿的多糖苗免疫原性差，而没有保护效果。因此多糖类的菌苗急需改进。 ;③目前，将多糖与载体蛋白共价连接，通过载体蛋白提供适当的T细胞表位，由T细胞协助B细胞产生多糖特异性抗体，使T细胞非依赖性抗原转变为T细胞依赖抗原，这类菌苗称为多糖-蛋白结合苗。如嗜血流感杆菌b(Hib)的结合苗已在几个国家获得证书，证明对不到18个月的儿童有很高的免疫原性，能诱导免疫记忆，免疫球蛋白的类型转换及抗体亲和力成熟，明显减少Hib菌的入侵感染与发病。; ;;;;（二）研制菌苗的新方法（New method of produce bacteria vaccine） 1、研制菌苗的新方法（new methods） 对细菌感染发病机制认识的深入及涉及许多病原体毒力决定簇如黏附素、侵袭素、荚膜多糖、脂多糖、毒素等编码基因及其产物的结构与功能的分析与鉴定，是不断设计和研制新型疫苗的重要基础。 针对不同的病原体致病特点和毒力决定簇的特点，发展和产生了不同的菌苗研制方法，得到不同类型的菌苗。 现将目前研制菌苗的新方法及可能的后选菌苗列于表5-4 。;表6-4 目前研制菌苗的新方法及可能的候选菌苗 ;;2.目前菌苗存在的问题 （1）尽管疫苗免疫取得了巨大的成功，但小于5岁的婴幼儿每年死于传染病的数目仍然很高。如疟疾几种腹泻病等均无有效疫苗，虽然卡介苗（BCG）使用几十年了，甚至纳入WHO的计划免疫，但其效果波动很大0%-80%。因此急需安全有效的结核菌苗问世。 ;（2）与病毒相比,基因工程菌苗及细菌核酸苗报导明显为少。至今国际上还没有成功满意的重组细菌苗提供人群使用。关于细菌毒素的分子及其编码基因与调控机制都比较清楚，因此，有关毒素的基因工程菌苗的构建或载体构建等均无问题。但细菌外膜上的其它结构如黏附分子，侵袭蛋白，鞭毛及脂多糖等分子结构十分复杂，编码基因多呈丛分布，如LPS的表达涉及近30个基因的级联反应，操作起来尚有困难。因此还有毒力相关或保护相关基因的分离、克隆和表达等基因工程菌苗研制的前期工作要做。 ;理想菌苗的条件P192 安全，无毒性 遗传性状稳定，无致癌性，无致畸变或致流产性。 结构简单清楚，可生物降解，有生物相容性，与组织抗原无免疫学交叉反应。 对各年龄组人群均有长时间的免疫保护作用。 多价，有更大的覆盖面，最好一次性免疫。 能口服，能有效诱导黏膜免疫。 为大量人群应用，疫苗必须廉价。 易于生产，储存及服务，不需冷藏。;第三节 重要细菌基因工程苗的研究进展P193;一、霍乱菌苗 P193 霍乱是由革兰氏阴性霍乱弧菌引起的烈性肠道传染病。 临床表现轻