分子生物学第七章蛋白质的生物合成.pptVIP

第七章 蛋白质的生物合成 7.1 遗传密码 7.2 tRNA 7.3 氨酰-tRNA合成酶 7.4 核糖体 7.5 与蛋白质合成有关的因子 7.6 蛋白质合成的生物学机制 7.7 蛋白质转运机制 7.1 遗传密码 7.1.1 三联子密码的设想 ☆ mRNA上每3个核苷酸翻译成蛋白质多肽链上的一个氨基酸，这3个核苷酸就称为一个密码，也叫三联子密码。翻译时从起始密码子AUG开始，沿mRNA5’→3’的方向连续阅读直到终止密码子，生成一条具有特定序列的多肽链。   ☆ mRNA中只有4种核苷酸，而蛋白质中有20种氨基酸，若以一种核苷酸代表一种氨基酸，只能代表4种(41=4)。若以两种核苷酸作为一个密码（二联子），能代表42=16种氨基酸。而假定以3个核苷酸代表一个氨基酸，则可以有43=64种密码，满足了编码20种氨基酸的需要。 7.1.2 三联子密码的破译 ☆ Francis Crick等人第一次证实只有用三联子密码的形式才能把包含在由AUGC四个字母组成遗传信息（核酸）准确无误地翻译成由20种不同氨基酸组成的蛋白质序列，实现遗传信息的表达。  用吖啶类试剂（诱导核苷酸插入或丢失）处理T4噬菌体rⅡ位点上的两个基因，使之发生移码突变，就生成完全不同的、没有功能的蛋白质。如果同时删去3个核苷酸，翻译出的蛋白质序列不发生变化，只是少了一个氨基酸。  另外：对烟草坏死卫星病毒的研究发现，其外壳蛋白亚基由400个氨基酸组成，相应的RNA片段长1,200个核苷酸，与三联子密码体系设想正好相吻合。 ☆ Nirenberg的实验 以均聚物、多聚物等为模板指导多肽的合成。 在含有tRNA、核糖体、AA-tRNA合成酶及其它蛋白质因子的细胞抽提物中加入mRNA或人工合成的均聚物、多聚物作为模板以及ATP、GTP、氨基酸等成分时又能合成新的肽链，新生肽链的氨基酸顺序由外加的模板来决定。 ⑴ 1961年，Nirenberg等人以多聚（U）作为模板时发现合成了多聚苯丙氨酸，从而推出UUU代表苯丙氨酸（Phe）。以poly（C）及poly（A）做模板分别得到多聚脯氨酸和多聚赖氨酸。 ⑵ 以特定序列的共聚物为模板指导多肽的合成。以多聚二核苷酸作模板可合成由2个氨基酸组成的多肽:????????? 5…UGU GUG UGU GUG UGU GUG…3 不管读码从U开始还是从G开始，都只能有UGU（Cys）及GUG（Val）两种密码子。 ⑶ 以共聚三核苷酸作为模板可得到有3种氨基酸组成的多肽。如以多聚（UUC）为模板，可能有3种起读方式：??????? 5’…UUC UUC UUC UUC UUC…3’ ???? 或 5’…UCU UCU UCU UCU UCU…3’ ???? 或 5 …CUU CUU CUU CUU CUU…3 分别产生UUC（Phe）、UCU（Ser）或CUU（Leu）。 多聚三核苷酸为模板时也可能只合成2种多肽： ???????? 5’…GUA GUA GUA GUA GUA…3’ ??????? 或5’…UAG UAG UAG UAG UAG…3’ ?????? 或5’…AGU AGU AGU AGU AGU…3’ 由第二种读码方式产生的密码子UAG是终止密码，不编码任何氨基酸，因此，只产生GUA（Val）或AGU（Ser）。 ⑷ 以随机多聚物指导多肽合成。 例如，以只含A、C的多聚核苷酸作模板，任意排列时可出现8种三联子，即CCC、CCA、CAC、ACC、CAA、ACA、AAC、AAA ，获得由Asn、His、Pro、Gln、Thr、Lys等6种氨基酸组成的多肽。 ☆ 核糖体结合技术的证明 在含核糖体、AA-tRNA的反应液中加入人工合成的三核苷酸如UUU、UCU、UGU等，保温后通过硝酸纤维素滤膜。加入三核苷酸可以促使其对应的AA-tRNA结合到核糖体上。游离的AA-tRNA因相对分子质量小可以通过滤膜，而与核糖体结合的AA-tRNA则留在滤膜上，这样可把已结合与未结合的AA-tRNA分开。 7.1.3 遗传密码的特点 ⑴连续性? ⑵简并性与偏爱性 ⑶通用性与专一性 （特殊性） ⑷终止密码 ⑸密码子与反密码子 7.2 tRNA 7.2.1 tRNA的结构 由于链内的碱基互 补配对，tRNA呈现 三叶草形的二级结构。 受体臂（acceptor arm）:主要由链两端序列碱基配对形成的杆状结构和3’端末配对的3-4个碱基所组成，其3’端的最后3个碱基序列永 远是CCA。 TφC臂是根据3个核苷酸