锌指蛋白A20在炎症性肠病发病机制中的作用.pdfVIP

硕 一卜论 文 正 文 第 一部 分 锌 指 蛋 白A 20 在 炎症 性肠 病 患儿肠 粘 膜 中 的表 达 及 意 义 [ 目的 ] 探 讨 炎 症 性 肠 病 患 儿 肠 道 炎症 反 应 与 锌 指 蛋 白A 20 表 达 水 平 之 间 的关 系 。 [方 法 ] 收集 2008 至 20 10年 就 诊 于 我 院并行肠 镜检 查 的患儿肠 道 勃膜 标 本共 57 份 。将 标本 分 为 正常对 照 组 (n 16 )、IB D 缓解 期组 (n 12 )、IB D 活动 期 组 (n 13 ) 和 非 IB D 肠 炎 组 (n二16 ) 。 内镜 下 取 各组 患 儿末 端 回肠 勃膜 标 本 ，采 用 荧 光 定量 P C R 和 免疫 组 化 法 检 测 A 20 、N F 一沼 、IL 一6 、IL 一8 的表 达 水平 。 [结 果 ] (1) N F 一KB 、A 20 在 正 常对 照 组肠 勃膜 中仅 微 量 表 达 ，IB D 活动 期 组 和 非 IB D 肠 炎 组N F 一KB 、A 20表 达 水 平 明显 高于 正 常 对 照 组 (P 均 0 .0 1) ; (2 ) IB D 缓 解 期 组较 正 常对 照 组N F 一出 【(9 .35士4 .84 ) % vs (0.57士0.44) % ，P 0 .01 」、IL 一6 (尸 0 .05 )、IL 一8 (P 0.05 ) 表 达 水 平 高 ，而A 20 在m R N A 水 平 (P 0 .05) 和 蛋 白水 平 【(0.36士0.15 ) oo，v: (0 .57士0.29 ) o0，，尸 0.0 11上表 达均 偏 低 ; (3 ) 与 非 IB o 肠 炎 组 相 比，IB n 活 动 期 组N F 一沼 [(24.17士11.27 )% vs (55.29士2 1.84 )% ，P 0 .0 1、 IL 一6 (P 0.05 )、IL 一8 (P 0 .0 1) 表 达 水平 明显升 高 ，而A 20在m R N A (尸0.05 ) 和 蛋 白水 平 [ (29 .23士11.70 ) % vs (16.8 1士5.90 ) % ，p 0.0 1」上 表 达 均 较 低 ; (4 ) IB D 缓 解 期 组 与 非 IB D 肠 炎 组 相 比，IL 一6 、IL 一8表 达 水 平 差 异 无 统 计 学 意 义 (尸均 0 .05 ) ， 而 A 20 在 m R N A 水 平 (P 0.0 1 ) 和 蛋 白水 平 【(29 .23士11.70 ) % vs (0.4 7士0 .25 ) % ，尸 0 .0 1]上 表 达 均 较 低 。 【结 论 】IB D 患 儿存 在 肠 道 炎症 反应 过 度 而A 20 表 达 水平 上 调 不 足 的现 象 ; A 20 表达 水平 的异 常可 能参 与 了IB D 的发 生和 发 展 。 第 二部 分 锌 指 蛋 白A 20在 调控肠 上皮 细 胞 炎症 反应 中的作 用 [ 目的 1 探 索 锌 指 蛋 白A 20 在 调控 肠 上 皮 细 胞 炎症 反 应 中 的作 用 。 [方 法 】 构 建 A 20 重 组 慢 病 毒 载 体 ，采 用 基 因感 染 的方 法 分 别 沉 默 和 过 表 达 H T-29 细胞 中的 A 20 基 因 ; 根 据干 预 方 式 的不 同，将 细 胞株 分 为三 组 ，即 H T-29 细 胞 组 ，A ZO 基 因过 表 达 组 ，A 20 基 因沉 默 组 。采 用 免疫荧 光和 w estem 一blot 的 方法 研 究在肠 上 皮细 胞 遭 受 L P S 刺 激后 增加 和 降低 A ZO 表达 对 N F 一KB 核 转位 的 影 响 ，其 次采 用 E LISA 的方 法 检 测 增 加 和 降低 A ZO 表 达 对 N F 一KB 信 号通 路 下 游 促 炎 细 胞 因子 T N F 一a 、工L 一lp 表 达 水 平 的影 响 。 [结 果 】()l 当肠 上 皮 细 胞 遭 受 L P S 刺激 后 ，A 20 表 达 水平 上 调 ，且 随着 L 尸S 刺 激 量 的增 加