G蛋白偶联受体功能性检测.PDFVIP

G 蛋白偶联受体功能性检测 HTRF 技术可用来进行第二信使检测、胞内信号分子检测和受体配体结合检测方案，从而从全方 位帮助您进行G 蛋白偶联受体的研究。 图7：G 蛋白偶联受体功能性检测 cAMP 检测 Cisbio 提供四个试剂盒进行cAMP 检测，分别针对不同的灵 敏度和线性范围，其检测原理均基于竞争法。试剂盒中有Eu 标记的cAMP 抗体和d2 标记的cAMP，抗体可以识别cAMP， 使Eu 与d2 接近。Eu 受到激发后，其能量可以共振转移到 d2 上，产生信号。当细胞中有cAMP 产生时，其与d2 标记 的cAMP 竞争抗体结合位点，使后者与Eu 标记的抗体距离增 大，不能产生能量转移，信号下降。 四个试剂盒的比较 图8：cAMP 的检测原理 图9：cAMP 试剂盒的比较 1 cAMP dynamic 2 拥有较高的检测灵敏度和比较大的线性范围，适合于大多数Gi/s 实验 cAMP 操作步骤 试剂盒操作步骤非常简单，只需要将细胞处理完毕，然后加入d2 标记的cAMP 和铕标记的抗体 即可。 图10：cAMP 操作步骤 订购信息 产 品 名 称 产 品 规 格 产 品货号 1,000 tests 62AM4PEB cAMP dynamic 2 20,000 tests 62AM4PEC 100,000 tests 62AM4PEJ 1,000 tests 62AM5PEB cAMP femto 2 20,000 tests 62AM5PEC 100,000 tests 62AM5PEJ 1,000 tests 62AM6PEB cAMP HiRange 20,000 tests 62AM6PEC 100,000 tests 62AM6PEJ 1,000 tests 62AM7PEB cAMP femto Tb 20,000 tests 62AM7PEC 100,000 tests 62AM7PEJ IP-One 检测 IP-One 试剂盒是钙流检测方法的替代解决方案。钙流反应非常快， 需要加样之后马上检测，所以需要配备自动加样的仪器才能检测。而 且，钙流检测只能针对与受体快速结合并发挥作用的化合物，不适合 反应较慢的化合物。IP-One 可以非常好地弥补上述缺憾。 IP-One 检测反映的是第二信使IP3 的含量。当样品中加入LiCl 后， IP-One 不再代谢，而是蓄积在细胞内。试剂盒基于竞争法，其中含 2 图11：IP-One 操作步骤 有Tb 标记的抗IP1 单抗和d2 标记的IP1。细胞所产生的IP1 和试剂盒所提供的标记了d2 的IP1 竞争抗IP1 抗体的抗原结合位点。当Tb 标记的抗IP1 抗体与d2 标记的IP1 结合后，会发生能量 共振转移，产生比较大的信号。随着细胞内产生的IP1 增多，游离的IP1 与抗体结合增多，信号 逐渐减少。 IP-One 操作步骤 整个实验过程非常简单，只需要将细胞处理完毕，加入d2