严重发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)总抗体检测试剂盒(ELISA)的研制.pdfVIP

E丽究 2016~(第37.)第7黯 可每每位，j~ 严重发热伴血，，1 、极就少综合征病毒(SFTSV) 总抗体捡到试剂盒(ELlSA) 的研制 马玉英 (宁夏贺兰县农牧植业局动物卫生监督所，宁夏贺兰 7502∞) 摘 要:为建立检测严重发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)血清总抗体的双抗房、夹心ELlSA 方法并 进行初步试用，通过原核表达得到SF1、SV-NP 重组蛋白，以该蛋白作为ELISA 的包拔和路标记抗尿，确定抗尿 的最佳包被浓度和血清稀锋度，优化各项试验条件，在此基础上研制试剂盒，并对试剂盒的重复性、特异性等方 面进行研究。 结果发现抗原最适包被浓度为4.0μgI时，血清的最佳稀释浓度为 1:40 ，重复性试验表明批内和批 间的变异性都低于10 % 。 该试剂盒敬惑性高、特异性强、重复性良好，可应用于SFTSV 的研究和临床检测。 关键词:严重发热伴血小板减少综合征病毒;抗体;嗨联免疫吸附试验 中图分类号: S85 1.4 文献标识码:B 文章编号:1 ∞4-5ω0(201 6)07-α)()3-03 近几年来，我国湖北、河南、山东等地相继发现一些以 引物、原核表达载体pET28a-NP 均由江苏疾病预防 发热伴血小板减少为主要表现的感染性疾病病例，该病的 控制中心病原微生物研究所构建。 主要传播途径为蝉虫的叮咬。 2010年5月.中国疾病预防 1.1.3 试剂及主要仪器 控制中心将该病毒引起的病例定义为严重发热伴血小板 病毒TRNA提取试剂Trizol 、胶回收试剂盒、质粒提取 减少综合征，并开展了病例的主动发现、搜索等监测工 试刑盒等购自大连宝生物工程有限公司;辣根过氧化物酶 作( 1 -飞 从病人血清中分离到 l 株病毒，并完成了病毒的 (HRP) 、弗氏完全、不完全佐剂购自美国Sigma公司;PCR 全基因序列测定和同源性比较，通过对病毒基因结构和形态 仪:德国 Biometra 公司产品;恒温仪、离心机:德国 特征的详细分析，确定该病毒为一种新型布尼亚病毒( Jl Eppendorf公司产品;DEM- n 自动酶标洗板机:北京拓普 o 2011 年3 月 17 日出版的国际权威医学刊物《新英格兰医 生产; MOOEL 680 型酶标仪;96 孔可拆式ELISA 酶标板: 学杂志》刊登了该研究成果，这是国际上首次报道这一布 丹麦NUNC公司生产。 尼亚科病毒。 1.2 方法 到目前为止，该病毒的检测方法还很有限，主要有 1.2.1 制备重组抗原 PCR检测、免疫荧光检测( I FA) 、血清学检测、电子显微镜 根据Trizol 试剂说明书从血清中提取总RNA， 通过 检测等1付。 然而这几种检测方法均存在一些缺陷，如病毒 RT-PCR技术扩增出SFTSV-NP基因，分别用限制性内切 核酸检测程序繁琐，耗时耗力且对仪器的要求高，电子显 酶BamHI 、 EcoR I 酶m上述扩增片段与质粒pM018习，回 微镜检测费用高且检测灵敏度低，要求检测者有熟练的技 收目的基因和载体片段，进行连接反应。 将连接产物转化 和，不利于SITSV 的快速检测和诊断。 研制操作简便、 感受态宿主菌E.coli OE3，挑取经酶m鉴定的单个白色菌落， 敏感性高、特异性好、能快速诊断SFTSV 的试剂盒和