K-ras基因突变通过调节E-cadherinβ-cateninp120蛋白复合体形成和RhoA蛋白活性对结肠癌细胞株Caco-2转移的影响.pdfVIP

中国医学科学院学报 ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE ·论著· K-ras 基因突变通过调节 E-cadherinlß-cateninlp120 蛋白复合体 形成和 RhoA 蛋白活性对结肠癌细胞株 Caco-2 转移的影响 李景甫1 ，李潇1 ， 2 ，钱家鸣1 ，路新卿1 ，杨红1 1 中国医学科学院 北京协和医学院 北京协和医院消化内科，北京 100730 2 首都医科大学 附属北京朝阳医院急诊科，北京 100020 通信作者:钱家鸣 电话/传真: 010，电子邮件: yuanjiah@gmai l. com 摘要:目的 观察K-ras 基因突变通过调节 E-cadheriν。-catenin/p120 蛋白复合体形成和 RhoA 蛋白活性对结肠癌 细胞株 Caco-2 转移的影响，探讨其促进结肠癌转移的相关机制。方法 将培养的结肠癌细胞株 Caco-2 分别给予空白质 粒 phr-GFP 转染(对照组)、 K-ras 基因突变型质粒phr-K-ras (Va112) 转染(转染组)、 phr-K-ras (Va112) 质粒转染+ 丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 途径特异性抑制剂 PD98059 处理 (MAPK 抑制组)和 phr-K-ras (Va112) 质粒转染+磷 脂酷肌醇3 激酶(PI-3K) 途径特异性抑制剂 LY294002 处理(PI-3K 抑制组)， Trar酬ell 细胞迁移实验检测细胞迁移率， 细胞免疫荧光检测 E-cadherin、。-catenin 蛋白表达及其在细胞内定位， Westem blot 检测细胞内 p120 蛋白的表达，免疫 沉淀检测与E-cadherin 结合的。-catenin 蛋白水平， Pull-down 实验检测 RhoA 蛋白活性。结果 转染组Caco-2 细胞的迁移 率为 (19.8 :t 5.6)% ，明显高于对照组的( 14. 0 :t 4. 2) % (P = O. 001 )和 MAPK 抑制组的( 15. 8 :t 1. 2) % (P = 0.044) ，但与 PI-3K 抑制组的( 17. 5 :t 2. 8) %差异元统计学意义 (P =0. 095) 。细胞免疫荧光检测结果显示，转染组细 胞膜上的 E-cadherin 和。-catenin 蛋白表达减少。 Westem blot 检测结果显示，转染组和 PI-3K 抑制组细胞内 p120 总蛋白 表达减少。免疫沉淀检测结果显示，转染组和 PI-3K 抑制组细胞内与 E-cadherin 结合的自-catenin 蛋自水平下降。 Pull­ down 实验检测结果显示，转染组细胞内的 RhoA 蛋白活性增加。结论 K-rω， 基因突变可以促进结肠癌细胞株 Caco-2 的 转移，其可能是通过 MAPK 途径减少 E-cadheriν。-catemνp120 蛋白复合体形成，增强 RhoA 蛋白活性来实现的。 关键词: K-ras 基因;突变; E-cadheriν。-catemνp120 蛋白复合体; RhoA 蛋白;结肠癌;转移 中图分类号: R73.37 文献标志码:A 文章编号: 1000-503X(2010)01-0046-05 DOI: 10. 3881/j. issn. 1000-503X. 2010. 0 1. 012 Effects of K-ras Gene Mutation on Colon Cance