转移潜能不同人肝癌细胞系差异蛋白 Annexin1的功能解析.pdfVIP

2∞5; 32 (12) 生物化学与生物物理进展 Prog. Bi.盹he也 Blophys. 1141 转移潜能不同人肝癌细胞系差异蛋白 Annexinl 的功能解析* 崔杰峰刘银坤代智周海君宋海燕 张丽君张予孙瑞霞陈洁汤创献 (垣M 大学附属中山医院肝癌研究所. r.海 200032) 摘要解析比较蛋白质组学筛出的差异蛋白Annexinl 的牛物学功能，证实其是否在肝癌转移复发中发挥作用分 别以 RT-PCR、蛋白质印迹及细胞兔授化学对芳异蛋臼Armexinl 在转移潜能不|司人肝癌细胞系中的表达情况进行 再验证，然后构建Annexinl 反义表达质粒，转染高转移潜能人肝癌细胞系 MHCC97H. 通过对MHCC97H细胞 的运动、侵袭、凋亡、生长周期、 MMPs 分泌、克隆形成等系列检测，观察目的蛋臼表达降低对其生物学行为的 影响，特别是转移特性的影响验证结果均证实 Annexinl 在有转移潜能人肝癌细胞系MHCC97L、 MHCC97H 中 里高表总转染Annexinl 反义重组表达质粒后， MHCC97H 细胞中Annex.inl 的表达被成功抑制-依据 MHCC97HpcDNA3 .1 (+) AS Annexin l, MHCC97 H pcDNA3 .I(+). MHCC97H 的检测排序，转染反义重组质粒后 的 MHCC97H 细胞穿过上室底膜的细胞数(运动实验)分别为 1 1.l 3土3.3]， 18.88û03. 21.86士3.38 ，穿过人工基 底膜细胞数(侵袭实验)分别是， 16.43士2.23. 16.40土l 灯. 16.86士1 刃，细胞平均集落形成率(克隆形成实验)分别 为 (14.33主0.46)%. (19.35士0.49)%. (20 .25:1:0.35)% , MHCC97H 细胞凋亡比例(FCM 分析)依次为 22.2%. 6.44%. 6.97%; 细胞周期再时相的比例依次为 GO-GI 期 79.5%176.34%/80.5%. S 期 13.26%/14.4%/9.69%. G2-M 期 7.250/019.260/019.81% ， 细胞培养上清 MMP9 的定量结果依次为 26.3 7μ此. 28 ∞~gIL. 3 1.90 ~gIL， MMP2 定量 结果依次为 29.46μ.gIL. 26.37μgIL. 26.53μ阜IL 明胶酶谱分析细胞培养土清显示，转染Annexinl 反义重组表达 质粒的 MHCC97H 细胞分泌的MMP9活性与对照比变化不明显，综合上述结果发现，转染 Annexinl 反义表达质粒 MHCC97H 细胞运动能力及集落形成率明显降低，凋亡细胞的比例增加，而侵袭潜能，细胞周期时相，细胞分泌 MMP2、MMP9的量均变化不明显提示，差异蛋白Annex皿1 可能通过影响细胞凋亡和细胞运动在肝癌细胞侵袭 转移过程中发挥作用 关键词人肝癌细胞系. Annexinl. 转移 学科分类号 R735.7 差异蛋白Annexinl 高表达于有转移潜能人肝 从而证实差异蛋白Annexinl 在肝癌转移复发中是 癌细胞系这新发现，是运用高通量的比较蛋白质 否发挥作用-由于差异蛋白Annexinl 是应用 2-DE 组学技术手段在转移 (MHCC97H 和 MHCC97L)与 结合 ESI-MS瓜~S 筛出的，受蛋白质筛选、鉴定技 不转移 (Hep3B) 的人肝癌细胞系中筛选出来的[lJ 术体系本身的影响，对获得的差异蛋白结果进行再 验证重关重要，也是下游蛋白功能解析的基础. Annexinl 是钊离子依赖结构相关磷脂结合蛋白， 属Annexin 超家族的一员.目前尚不清楚Annexinl 1 材料和方法 的确切生理功能，认为与膜聚集，细胞信号传导，