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乳酸菌的分离和初步鉴定(DOC 5页)
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乳酸菌的分离和初步鉴定
刘海音 张超
(长春师范学院生物系,长春,130032)
摘要:本文采用BCG牛乳培养基琼脂平板筛选乳酸菌,经过连续6次以上的传代,以达到分离提纯,镜检时观察到链球状和杆状两种形状。为了鉴定分离出的菌种,做了一系列的生理生化反应实验,如吲哚试验的反应结果为阴性,糖发酵试验的反应结果为阳性。此外还进一步做了小型发酵实验,检测出了乳酸的存在⑴。以上实验结果符合乳酸菌的特征,从而证实该分离出的菌种为乳酸菌,杆状的叫做短乳杆菌,链球状的叫做乳链球菌。
关键词: 乳酸菌 分离 鉴定
乳酸菌为一群可发酵碳水化合物以获取能量,并生成大量乳酸的一类细菌的总称。利用发酵技术保藏食品,最典型的是通过乳酸菌的发酵。这在发酵乳工业中已经得到广泛的应用。利用天然的或经筛选的乳酸菌发酵,已经生产出多种不同类型的发酵乳。因而分离和鉴定乳酸菌对人类的生产和生活都具有非常重要的意义。本报告采用BCG牛乳培养基琼脂平板筛选和分离乳酸菌,利用镜检观察到了链球状和杆状两种形状。通过吲哚试验和糖发酵试验以及小型发酵实验证明该菌种为乳酸菌,杆状的叫做短乳杆菌,链球状的叫做乳链球菌
材料和方法
1.1材料
选用沈阳乳业有限责任公司乳品一厂生产的辉山纯酸奶
1.1.2 培养基
BCG牛乳培养基
A(溶液):脱脂奶粉100g, 水 500 ml, 加入1.6%溴甲酚绿(B.C.G)乙醇溶液 1 ml,
80 摄氏度灭菌20 min.
B(溶液): 酵母膏 10 g, 水 500 ml, 琼脂 20 g, PH : 6.8 121摄氏度灭菌20 min
以无菌操作趁热将A ,B 溶液混合均匀后倒平板。
乳酸菌培养基
牛肉膏 5 g , 酵母膏 5 g , 蛋白胨 10 g ,葡萄糖 10 g , 乳糖 5 g , 氯化钠 5 g ,
水 1000 ml , PH : 6.8
121摄氏度湿热灭菌20 min
蛋白胨水培养基
蛋白胨 10 g , 氯化钠 5 g , 水 1000 ml , PH : 7.2 ~ 7.4
121 摄氏度湿热灭菌 20 min
糖发酵培养基
蛋白胨水培养基 1000 ml , 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1~2 ml ,PH : 7.6 , 另配 20%糖溶液
(葡萄糖,蔗糖)各 10 ml.
制法:
1).将上述含指示剂的蛋白胨水培养基(PH : 7.6 )分装于试管中,在每管内放一倒置的小玻璃管(Durhem tube),使充满培养液。
2).将已分装好的蛋白胨水培养基和20%的各种糖溶液分别灭菌,蛋白胨水培养基121摄氏度灭菌 20 min ,糖溶液112摄氏度灭菌 30 min .
3) . 灭菌后,每管以无菌操作分别加入20%的糖溶液0.5 ml , 则成1%的浓度。
1.1.3 有关溶液
1.6 % 溴甲酚紫乙醇溶液 :溴甲酚紫 1.6 g 溶于100 ml 乙醇中,贮存于棕色瓶中保存备用。
吲哚试剂:对二甲基氨基苯甲醛 8 g , 95 % 乙醇 760 ml , 浓盐酸 160 ml.
10 % 硫酸
2 % 高锰酸钾
含氨的硝酸盐溶液 : 称取硝酸银 2 g , 蒸馏水 100 ml ,待硝酸银溶解后,取出10 ml 备用,向其余的90 ml 硝酸银中滴加氨水,即可形成很厚的沉淀,继续滴加氨水至沉淀刚刚溶解成为澄清溶液为止,再将备用的硝酸银慢慢滴入,则溶液出现薄雾,但轻轻摇动后,薄雾状的沉淀又消失,继续滴入硝酸银,直到摇动后仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为止。
1.2 方法
1.2.1 乳酸菌的分离提纯
直接用接种环蘸取纯酸奶平板划线分离,置40摄氏度培养48小时。挑选出乳酸菌进行连续6次以上的传代,以达到提纯。
1.2.2 乳酸菌的鉴定
吲哚试验
1).试管标记:取装有蛋白胨水培养基的试管2支,分别标记乳酸菌和空白对照。
2).接种培养:以无菌操作分别接种少量菌苔到标记乳酸菌的试管中,标记有空白对照的不接种,置37摄氏度恒温箱中培养24~48小时。
3).观察记录:在培养基中加入乙醚1~2 ml ,经充分振荡,使吲哚萃取至乙醚中,静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面,此时沿管壁缓慢加入5~10滴吲哚试剂,如有吲哚存在,乙醚层呈玫瑰色,此为吲哚试验阳性反应,否则为阴性反应。
糖发酵试验
1).试管标记:取分别装有葡萄糖,蔗糖发酵培养液试管各2支,每种糖发酵试管中分别标记乳酸菌和空白对照。
2).接种培养:以无菌操作分别接种少量菌苔至以上各相应试管中,每种糖发酵培养液的空白对照均不接菌。将装有培养液的杜氏小管倒置试管中,置37摄氏度恒温培养箱
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