微生物学检验第3版2012铜绿假单胞菌与痰液.pptVIP

铜绿假单胞菌 1、革兰阴性杆菌，无芽孢，动力阳性 * 4. 压片法观察动力情况 具体实验操作 第二天的主要操作： * * * 4. 观察生化反应，查表鉴定 具体实验操作 第二天的主要操作： * 非发酵细菌生化鉴定编码表 O-F试验 4 3 2 1 氧化酶 拘橼酸盐 麦芽糖 精氨酸酶 精对 甘露醇 木糖 硝酸盐还原 DNA 酶 乙酰氨酶 厌氧 需氧 淡绿 黄色 无色 淡绿 淡绿 黄色 紫色 红色 黄色 蓝色 黄色 淡绿 淡绿 黄色 黄色 黄色 无色 红色 绿色 灰白 黄色 红色 原来颜色 阳性颜色 淡绿 黄色 标记为红色的加石腊油 * 5. 根据以上的鉴定，报告出鉴定结果 具体实验操作 第二天的主要操作： * 问题与思考 大肠杆菌与铜绿假单胞菌的氧化酶试验有什么不同？ 大肠杆菌、铜绿假单胞菌菌落在中国蓝平板上有什么不同？ * 痰液和呼吸道标本的微生物检查及铜绿假单胞菌培养鉴定 临床微生物与免疫学教研室 * 2、产生荧光素和水溶性的绿脓素，培养物呈蓝绿色； 3、在血平板上形成大而扁平、湿润、有金属光泽、蓝绿色、透明溶血环菌落，有生姜味； 4、在中国蓝平板上形成不发酵乳糖菌落（不发酵乳糖细菌的菌落是半透明，淡紫红色，分解乳糖的细菌是大而浑浊的蓝色菌落 ） * 铜绿假单胞菌在血琼脂平板上的菌落特征 * 5、生化特征 氧化酶 ＋ O/F：O KIA：K/K 枸櫞酸盐利用：＋ 精氨酸双水解：＋ 明胶液化：＋ 硝酸盐还原：N2 * 硝酸盐还原试验 硝酸盐 亚硝酸盐 （红色） 硝酸盐 氨、氮气 锌粉还原 亚硝酸盐 阳性 阳性 不变色 亚硝酸盐 还原 还原 还原 未还原 锌粉 未反应 阴性 不变色 * 目的要求 掌握呼吸道标本的细菌学检验和报告方法 掌握銅绿假单胞菌的培养特征、主要微生物特性及鉴定方法。 了解呼吸道标本的采集方法。 * 器材和试剂 1、标本：痰液标本 2、菌种：铜绿假单胞菌 3、培养基：血平板、中国蓝平板、克氏双糖斜面培养基、半固体培养基、非发酵菌微量生化管等。 * 4、试剂：氧化酶纸片、3%过氧化氢、革兰染色液、无菌生理盐水及生化管配套试剂。 5、其它 ：显微镜、培养箱、小试管、载玻片、接种针、接种环、酒精灯、火柴、非发酵菌生化编码表等。 器材和试剂 * 1. 鼻咽拭子 采集时，患者用清水漱口，对光而坐，头向上仰张大口，用压舌板轻压舌根，取无菌鼻咽拭子绕过悬雍垂，在鼻咽腔、悬雍垂后侧反复涂抹数次小心取出，避免接触口腔部其他组织。 2．咽拭子 将拭子用无菌生理盐水湿润，用压舌板轻压舌根，暴露整个口咽部。先用拭子轻擦扁桃体表面后弃去，再取1支湿润的拭子轻压扁桃体，擦取挤压出的分泌物，或擦取伪膜等病变部位。 标本的采集 * * 3. 痰液标本 （1）自然咳痰法：受检者用清水溯口数次后，用力咳嗽自气管深部将痰咳出吐至无菌容器中。对痰量少或无痰等咳痰困难者，可雾化吸入45℃左右的10%氯化钠水溶液，使痰容易排出。对于幼儿，可轻轻压迫胸骨上部气管，使其咳嗽而取之。 标本的采集 * （2）气管镜采集法：用气管镜在肺部内病灶处直接吸取标本，或用气管刷采取标本。 （3）气管或环甲膜穿刺法：主要用于厌氧菌培养。 标本的采集 * 革兰阳性细菌 革兰阴性细菌 正常菌群 α和γ链球菌、微球菌、表皮葡萄球菌、四联球菌、白喉以外的棒状杆菌、乳杆菌 除脑膜炎和淋病奈瑟菌外的其他奈瑟菌、其他嗜血杆菌 上呼吸道常见致病菌 化脓性链球菌、金黄色葡萄球菌、白喉棒状杆菌、结核分枝杆菌、白色念珠菌 脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、百日咳鲍特菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌 下呼吸道常见致病菌 化脓性链球菌 、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、白喉棒状杆菌、结核分枝杆菌、厌氧菌、放线菌、奴卡菌 脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、产气肠杆菌、嗜肺军团菌 痰液标本常见的分离菌 * 血平板 巧克力平板 中国蓝平板 鼻咽拭子 直接涂片染色检查 革兰染色 异染颗粒 初步报告 白喉棒状杆菌培养 菌落形态、涂片染色 初步报告 生化反应、血清学鉴定 检验程序 常规培养 百日咳杆菌培养 血清斜面培养基 鸡蛋培养基 鲍-金培养基 亚碲酸钾血平板纯培养 菌落形态、涂片染色 * 血平板 巧克力平板 中国蓝平板 普通培养 普通培养 普通培养 35℃、18~24h 35℃、18~24h 35℃、1