微生物学实验8-cmx-2011.pptVIP

点评 革兰氏染色效果较差，脱色时间控制不好。 荚膜染色效果良好，黑色素染液涂片的厚度 绘图进步较大，但菌体比例尚需注意 图片名称需要规范且合理 思考题 1、荚膜染色，为什么不能热固定？ 2、荚膜负染法，荚膜为何不着色而菌体着色？ 思考题 可用什么方法证明革兰氏染色是成功的？ 革兰氏染色中，哪一个步骤可以省去而不影响最终结果？在什么情况下可以采用？ 革兰氏染色哪一步最关键？ 背景知识 酵母菌是一个通俗名称，一般泛指能发酵糖类的各种单细胞真菌。酵母菌能发酵糖类产能，其生境一般为高糖、偏酸。 一 实验目的 1.观察酵母的形态及出芽生殖方式 2.学习区分酵母菌死活细胞的鉴别方法 背景知识 宏观 菌落特征：和细菌菌落极为相似，表面湿润、粘稠，与培养基结合不紧密，易挑起。但比细菌菌落大而厚，颜色比较单一，大多乳白色、只有少数为红色、黑色等，不同种类的菌落在形态、质地和边缘特征上均表现不同。菌落光滑或起皱，平整或突起，边缘圆整或有不规则的毛状物。菌落特征可作为酵母菌菌落鉴定的依据之一。（总之，酵母菌细胞较细菌细胞大10倍左右，表现在菌落形态上就有酵母菌的菌落直径较大、菌落隆起明显等特点） 酵母菌繁殖方式为无性繁殖和有性繁殖两种。正常情况下以无性繁殖为主，无性繁殖主要方式是出芽方式，有的是分裂繁殖；酵母菌的有性繁殖形成子囊和子囊孢子。 成熟的酵母菌细胞，先长出一个小芽，芽体细胞长到一定程度，脱离母细胞继续生长，尔后形成新个体。有多边出芽、两端出芽、和三边出芽。 二 染色原理 由于细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美兰染液水浸片法或水-碘液浸片法来观察酵母形态和出芽生殖方式。 美蓝是一种无毒性的染料，是活体染料的一种，是碱性染料。它的特性是氧化态呈蓝色，还原态呈无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。 因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的、而死细胞或新陈代谢微弱的衰老细胞呈蓝色和淡蓝色，借此即可对酵母细胞进行死活鉴定。 三、实验材料 ： 1.菌种 啤酒酵母 2.染液 吕氏碱性美蓝液 3.器材及用具 接种环、酒精灯、载玻片、盖玻片、吸管、镊子、显微镜、恒温培养箱。 酿酒酵母菌细胞形态多为卵圆形，在高倍镜下清晰可见，并可观察到其细胞内的液泡及颗粒状内含物，但观察不到细胞核。 芽殖的形态为：在较大的母细胞上生长着较小的子细胞，两者间呈藕节状连接。细胞呈无色的为活细胞，呈蓝色的为死细胞或衰老的细胞。 注意事项 制备菌悬液时，不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。 水制片，染料或蒸馏水不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片时，菌液容易溢出或产生气泡，影响观察。 盖玻片不宜平着放下，应倾斜慢放，避免产生大量气泡。 注意区别出芽与酵母菌重叠的情况。 五、实验结果 图示酿酒酵母菌的细胞、芽殖形态。对实验进行简单分析、描述。记录死、活细胞的大致比例P75。 思考题： 1. 在显微镜下，酵母菌有哪些突出的形态特征区别于一般细菌。 2.吕氏碱性美蓝染液浓度及作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量计数有什么影响，试分析其原因。 一.实验目的 学习测微技术，测量酵母细胞的直径（宽度）和长度。 二..实验原理 微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一。由于菌体很小，只能在显微镜下来测量。光学显微镜中，用来测量细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺 目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10 mm长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间相重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于在显微镜不同的接目镜和接物镜系统下，放大倍数不同，目镜测微尺每格所示长度随显微镜放大倍数而变化。所以在使用前，须用镜台测微尺来校正目镜测微尺。 镜台测微尺形如载玻片，在中央的圆形盖片下，有一长为1mm的刻度，精确等分为100格，每格长10μm。故用已知长度的台尺校正目尺，即可求出目尺一格的长度。 三..实验器材 1.菌种酵母菌悬液 2.器材目镜测微尺、镜台测微尺、显微镜、盖玻片、无菌滴管、双层瓶、擦镜纸等。 四 实验步骤 1.将目镜测微尺装入目镜内，刻度朝下，并将镜台测微尺置载物台上。 2.用低倍镜观察到镜台测微尺的刻度。 3.换用高倍镜测量，先用镜台测微尺标定。计算出目镜测微尺每格的长度。移动镜台测微尺和转动目镜测微尺，使二者的刻度平行，并使两尺的第一条线重合。向右寻找另外相重合的直线，记录两重合刻度间目镜测微尺和镜台测微尺的格数，由公式算出目镜测微尺每格长度。 五.实验报告 将实验结果记录于１，表２中 注意事项 光线调节，不宜太亮，以免找不到台尺 菌体不同生长阶段细胞大小变化大，以对数生