微生物学实验—张小葵、赵丽华.pptVIP

微生物学实验 实验一 、培养基的制备 实验目的 明确培养基的配制原理 通过对基础培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤 掌握玻璃器皿的包扎方法 实验原理 培养基是人工配制的供给细菌或其他微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。培养基必须具备下列条件：①含有碳源；②氮源；③磷源；④无机盐和生长因子；⑤水分和合适的pH。培养基须经灭菌后方可使用。 实验步骤 配培养基（250ml/组） 牛肉膏蛋白胨培养基（P50、 P214 ） 高氏Ⅰ号培养基（P54、 P214 ） 查氏培养基（ P214 ） 包扎移液管（1支/人）、培养皿（4皿/人），做棉花塞。 分装入试管（ 2个/人）和500ml三角烧瓶内（1个/组），注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。固体分装的装量不超过管高的1/5，灭菌后取出斜躺凝固成斜面。 在试管（捆扎好）、三角烧瓶的棉塞外包两层报纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞。注明培养基名称、组别、日期等。 实验二、消毒(disinfection)与灭菌(sterilization) 实验目的 了解湿热灭菌、干热灭菌和紫外灭菌的原理和应用范围 学习各种灭菌方法的操作技术 实验原理（略） 实验步骤 将包扎好的移液管、培养皿放入干热灭菌箱内，160℃，2h。 将包扎好的试管、锥形瓶放入高压蒸汽灭菌锅，121 ℃，20min。 灭菌结束，摆斜面(﹤1/2) ，备用。 超净工作台紫外灭菌30min。 实验三、普通光学显微镜的使用及细菌的简单染色 实验目的 了解普通光学显微镜的结构、基本原理 掌握油镜的正确使用方法 掌握简单染色法的原理及操作步骤 实验三、普通光学显微镜的使用及细菌的简单染色 二.实验原理 油镜的使用 简单染色 这是最基本的染色方法，由于细菌在中性环境中一般带负电荷，所以通过采用一种碱性染料如美兰、碱性复红、结晶紫、孔雀绿、番红等进行染色。这类染料解离后，染料离子带正电荷，故使细菌着色。 实验材料 菌种：枯草芽孢杆菌（B.subtillus） 染液：草酸铵结晶紫染液、碱性复红等 其他物品：无菌水、显微镜、载片、滤纸、香柏油、乙醇乙醚混合液、擦镜纸、接种环 实验步骤 涂片→干燥→固定(在微火上通过3—4次)→染色（染色1min）→冲洗→吸干→镜检 实验结果讨论 思考题 实验四、环境中微生物的分离与纯化 实验目的 学习、掌握微生物稀释分离、划线分离等技术 学习从样品中分离、纯化出所需菌株 学习掌握斜面接种技术 实验原理（略） 实验材料 菌源：土样10g 培养基 无菌水：配置生理盐水，分装于锥形瓶中，每瓶装90ml，及玻璃珠，灭菌，待用。 其他物品：无菌培养皿、无菌移液管、无菌玻璃涂棒、称量纸、药勺 实验步骤 采土样：选择肥沃土壤,去表层土,挖5~25cm深度的土壤数10g,装入已灭菌的牛皮纸袋,封好袋口,带回实验室。 倒平板（8个/组） 制备土壤稀释液：称取土样10g， 放入盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，摇30min。 取样：用无菌棉签沾取菌悬液，涂布于培养皿中某一处。（4个/皿） 用接种环从接种处划线分离。 贴标签，37℃倒置培养，24h。 实验结果与讨论 思考题 实验五、细菌的革兰氏染色 实验目的 掌握革兰氏染色法的原理及操作步骤，观察细菌形态 掌握无菌操作和油镜的使用方法。 实验原理 G﹢菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞壁内。呈紫色。 Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。 实验材料 1．菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌斜面（37℃下培养10小时左右） 2．染液：结晶紫染液、95%乙醇、碘液、番红染液、蒸馏水。 3．用具：载玻片、接种环、酒精灯、火柴、香柏油、乙醇乙醚混合液、擦镜纸、显微镜等。 实验步骤 涂片：将大肠杆菌（Escherichia.coli）、 枯草芽孢杆菌（Bacillus.sub）斜面分别涂片、干燥、固定。 初染：加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟，水洗 媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖一分钟，水洗 脱色：将水甩净，并衬以白背景，用95%乙醇滴洗至刚刚无紫色为止，约20—30秒，立即用水冲净乙醇 复染：用番红液染1--2分钟，水洗 镜检 结果与讨论 思考题 实验六、细菌的芽孢染色 实验目的 学习细菌的芽胞染色法 实验原理 细菌的芽胞具有厚而致密的壁，透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽胞不着色（芽胞呈无色透明状）。芽胞染色法就是根据芽胞既难以染色而一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的。所有的